[发明专利]一种扶桑绵粉蚧表皮透射电镜样品制片方法

说明书

本发明提供了一种扶桑绵粉蚧表皮透射电镜样品制片方法。具体地，本发明提供了一种昆虫表皮透射电镜样品的制备方法，所述方法包括如下步骤：取样、漂洗、脱水、渗透、干燥、切片，然后将所述切片后的样品经柠檬酸铅溶液染色，从而得到扶桑绵粉蚧表皮透射电镜样品。

技术领域

本发明涉及农业科学领域，具体地，本发明提供了一种扶桑绵粉蚧表皮透射电镜样品制片方法。

背景技术

扶桑绵粉蚧Phenacoccus solenopsis Tinsley(半翅目粉蚧科)是一种世界性的入侵性害虫。其对环境非生物胁迫的适应性强，可危害100多种作物与园林植物，防治困难，这与其体表有丰富蜡泌物、寄主范围广、繁殖能力强等特点有关。当前，防治扶桑绵粉蚧的主要方法为喷施化学农药，即化学防治，表皮作为昆虫与外界直接接触的屏障，会直接影响到防治效果。

国内对棉蚧表皮结构研究较少，对于蚧类昆虫体壁研究较多的集中在白蜡虫Ericerus pela(半翅目蜡蚧科)中，由于其雌虫通过表皮增厚来适应环境越冬，并具有极强的泌蜡能力而成为研究热点。针对粉蚧类昆虫，研究者的视线多聚焦在粉蚧类昆虫的表皮蜡泌物上，常采用扫描电镜的方法观察表皮上腺体结构等。尚未有运用透射电镜技术研究扶桑绵粉蚧表皮结构的相关研究。

昆虫表皮由三个主要的复合层组成，即外层的外包膜(Envelope)、中间的上表皮层(Epicuticle)和内部的原表皮层(Procuticle)。外包膜由脂类和蛋白质组成，可通过共价结合形成蛋白质-醌复合物，其结构十分稳定。扶桑绵粉蚧表皮没有明显的角质层增厚的情况，再加上其体型较小，常规的样品制片方法不能清晰地区分外包膜和上表皮层。

对此，本发明提出一种经检验能有效分辨扶桑绵粉蚧表皮外包膜结构的透射电镜样品制片方法，可运用推广于粉蚧类外表皮结构研究透射电镜样品的制片。

发明内容

本发明的目的在于根据现有技术进行改进，提供一种扶桑绵粉蚧表皮透射电镜样品的制备方法及其应用。本发明的扶桑绵粉蚧表皮透射电镜样品的制备方法，能够直接、客观、准确反映和区分扶桑绵粉蚧表皮结构中的外包膜。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：提供一种扶桑绵粉蚧表皮透射电镜样品的制备方法，包括如下步骤：

取样：解剖活虫样品的虫体表皮并清除内容物，从而获得虫体表皮样品；

漂洗：对虫体表皮样品进行一次或多次漂洗；

脱水：对漂洗后的样品进行脱水处理，得到脱水后的虫体表皮样本；

渗透：用Spurr包埋剂与丙酮混合液处理所述的样本后，用包埋剂渗透处理样品；

干燥：将处理完毕后的样品加入纯Spurr包埋剂中整姿并加热干燥；

切片：对所述的样品进行切片；

染色：将所述切片后的样品经柠檬酸铅溶液染色，从而得到扶桑绵粉蚧表皮透射电镜样品。

在一种优选的实施方式下，所述的柠檬酸铅溶液的浓度为0.05-0.2M。

作为本发明所述制备方法的优选实施方式，取样步骤中，所述的解剖为活体解剖，解剖时不完全将虫体腹面划破，可清除组织内容物的同时，不破坏表皮的形态，可防止后续步骤表皮皱缩变形。

作为本发明所述制备方法的优选实施方式，解剖完成后，将样品放在滤纸上使样品干燥，后立刻放入装有2.5％戊二醛固定液的1.5ml离心管中。

作为本发明所述制备方法的优选实施方式，样品收集完成后，短暂离心使样品沉淀于管底，并使样品充分接触固定液，小心吸取上层固定液，加入新固定液。