[发明专利]一种利用CD155评价间充质干细胞生物学效力的方法

说明书

本发明公开了一种利用CD155评价间充质干细胞生物学效力的方法，使用荧光标记的抗体标记间充质干细胞表面的膜蛋白CD155，并采用流式细胞仪检测细胞CD155的阳性率和平均荧光强度MFI，通过检测间充质干细胞表面CD155的表达水平来评价该间充质干细胞的生物学效力，所述生物学效力是指间充质干细胞的免疫抑制活性，通过间充质干细胞与活化外周血单个核细胞共培养，对外周血单个核细胞分泌IFN‑γ和TNF‑α的抑制能力，本发明不同于以往通过ELISA检测细胞因子或蛋白来评估间充质干细胞生物学效力的方法，本发明通过流式细胞仪检测间充质干细胞表面CD155的表达水平即可快速判断该细胞的生物学效力，简便快捷，具有较好的应用前景，有利于推广应用。

技术领域

本发明涉及生物医学技术领域，尤其涉及一种利用CD155评价间充质干细胞生物学效力的方法。

背景技术

间充质干细胞是一群具有自我更新、多向分化的异质性的亚全能干细胞。已知的间充质干细胞具有免疫调控、促进血管新生、促进组织损伤修复等作用，其免疫调控主要通过旁分泌和直接接触介导，但具体机制尚不明确。目前已知的间充质干细胞介导免疫调控主要通过旁分泌的细胞因子完成，如PGE2，IDO，IL-10，TGF-beta等，同时其细胞表面的膜蛋白也被报道参与免疫调控过程，如ICAM-1，VCAM-1，TLR3，TLR4，PD-L1和PD-L2等（Mesenchymal stem cell immunomodulation: mechanisms and therapeuticpotential. Trends Pharmacol Sci.2020 Sep;41(9):653-664）。鉴于间充质干细胞的多种生物学功能，其具备药物属性，但由于其介导免疫调控的作用机理非常复杂并且难以确定标准品，而使得其生物效力评价成为其质量控制的难题。目前对于间充质干细胞药物的质量评价方法主要是检测其对活化外周血单个核细胞的增殖抑制和分泌TNF-α的抑制水平，以及对特定淋巴细胞亚群的检测（Th1/Treg/Th17），操作内容复杂且造价很高。考虑到间充质干细胞药物的批量检测的高额成本，企业和学校的科研工作者尝试使用替代性的功能指标来对间充质干细胞的生物学效力进行评估，即用其自身表达的关键的细胞因子或蛋白与其生物学效力建立联系，并以此作为其质量评价的方法。目前已知的用于评价间充质干细胞生物学效力的替代性标志物，包括公开号为CN109576334A的发明专利公开的PGE2，公开号为CN110938668的发明专利公开的TNFRI，公开号为CN102643909B的发明专利公开的Galectin-3等。但细胞因子的ELISA检测存在诸多问题，如细胞培养和细胞因子收集过程需要较长时间，且人为操作较多，步骤繁琐容易污染，细胞因子自身不稳定极容易降解，ELISA试剂盒的批间差异等。根据国际细胞治疗协会的建议，间充质干细胞免疫抑制活性可以作为其生物学效率的检测方法。为了缩短检测时间，减少误差，我们开发了本方法，通过流式细胞仪检测细胞表面的关键膜蛋白CD155来直接判断其生物学效力，方便快捷。