[发明专利]一种牛乳及其制品中A1β-酪蛋白、A2β-酪蛋白的测定方法

权利要求书

1.一种牛乳及其制品中A1β-酪蛋白、A2β-酪蛋白的测定方法，其特征在于，所述测定方法包括以下步骤：

(1)配制β-酪蛋白标准溶液；

(2)配制第一试剂、第二试剂以及流动相；

(3)对奶样进行前处理：乳品试样溶解后，吸取乳品试样加入第一试剂，混匀静止后离心处理，除去表层乳脂，取底层溶液加入第二试剂，混匀，过滤膜上机检测备用。

(4)采用液相色谱仪对步骤(3)前处理完成的乳品试样进行分离，根据出峰顺序确定A1β-酪蛋白、A2β-酪蛋白；

(5)计算A1β-酪蛋白、A2β-酪蛋白的含量。

2.根据权利要求1所述的牛乳及其制品中A1β-酪蛋白、A2β-酪蛋白的测定方法，其特征在于，所述步骤(1)中配制β-酪蛋白标准溶液的操作为：将β-酪蛋白标准物质分成小片絮状后放入容器中加入水溶解，制成β-酪蛋白标准溶液。

3.根据权利要求1所述的牛乳及其制品中A1β-酪蛋白、A2β-酪蛋白的测定方法，其特征在于，所述步骤(2)中的第一试剂，以重量份计包括：双-三羟甲基氨基甲烷0.2-0.25份；盐酸胍5.70-5.80份；柠檬酸钠0.013-0.015份；二硫苏糖醇0.025-0.035份。

4.根据权利要求1所述的牛乳及其制品中A1β-酪蛋白、A2β-酪蛋白的测定方法，其特征在于，所述步骤(2)中的第二试剂由盐酸胍，加三氟乙酸溶液充分溶解后定容得到。

5.根据权利要求1所述的牛乳及其制品中A1β-酪蛋白、A2β-酪蛋白的测定方法，其特征在于，所述步骤(2)中的流动相中三氟乙酸溶液为流动相A，乙腈为流动相B。

6.根据权利要求1所述的牛乳及其制品中A1β-酪蛋白、A2β-酪蛋白的测定方法，其特征在于，所述步骤(4)中设定液相色谱仪的检测波长214nm，C8色谱柱规格4.6*150mm，3.6μm，柱温50℃-55℃，流动相A为0.1％三氟乙酸水溶液，流动相B为乙腈，梯度洗脱条件下对标准品及乳品试样进行检测。

7.根据权利要求1-6任一项所述的牛乳及其制品中A1β-酪蛋白、A2β-酪蛋白的测定方法，其特征在于，所述步骤(4)中确定出峰顺序的方式为通过未筛选的奶牛的奶源与经DNA筛选的A2奶牛的奶源同时检测与β酪蛋白标准物质进行比较，确认A1β-酪蛋白、A2β-酪蛋白的出峰时间和出峰顺序。

8.根据权利要求7所述的牛乳及其制品中A1β-酪蛋白、A2β-酪蛋白的测定方法，其特征在于，所述步骤(5)中计算A1β-酪蛋白、A2β-酪蛋白含量的方法为：β-酪蛋白标准工作液中的A1β-酪蛋白与A2β-酪蛋白，通过面积归一化法计算各自的修正系数，通过β-酪蛋白标准系列工作液浓度计算的样品中的A1β-酪蛋白与A2β-酪蛋白在乘以各自的修正系数后，即为样品中检测的A1β-酪蛋白与A2β-酪蛋白浓度，根据称样质量，定容体积，稀释倍数计算样品中A1β-酪蛋白与A2β-酪蛋白的含量。

9.根据权利要求8所述的牛乳及其制品中A1β-酪蛋白、A2β-酪蛋白的测定方法，其特征在于，所述第一试剂的溶剂为0.1％三氟乙酸。

10.根据权利要求9所述的牛乳及其制品中A1β-酪蛋白、A2β-酪蛋白的测定方法，其特征在于，所述步骤(1)中配制β-酪蛋白标准溶液配制完成后在-20℃保存。