[发明专利]一种牛乳及其制品中A1β-酪蛋白、A2β-酪蛋白的测定方法

说明书

本发明涉及牛乳蛋白领域，具体公开了一种牛乳及其制品中A1β‑酪蛋白、A2β‑酪蛋白的测定方法，所述测定方法包括以下步骤：(1)配制β‑酪蛋白标准溶液；(2)配制第一试剂、第二试剂以及流动相；(3)对奶样进行前处理：乳品试样溶解后，吸取乳品试样加入第一试剂，混匀静止后离心处理，除去表层乳脂，取底层溶液加入第二试剂,混匀，备用；(4)采用液相色谱仪对步骤(3)前处理完成的乳品试样进行分离，根据出峰顺序确定A1β‑酪蛋白、A2β‑酪蛋白；(5)计算A1β‑酪蛋白、A2β‑酪蛋白的含量。本发明解决了现有技术中的牛乳及其制品中A1β‑酪蛋白、A2β‑酪蛋白的检测时间长，难以对A2β‑酪蛋白做定量分析的问题。

技术领域

本发明属于牛乳蛋白领域，尤其涉及一种牛乳及其制品中A1β-酪蛋白、A2β-酪蛋白的测定方法。

背景技术

早期所有家养奶牛只含有A2β-酪蛋白，后因自然基因突变，出现了A1β-酪蛋白的变体，经过长期的繁衍，导致全球奶牛普遍出现了A1型奶牛、A1A2型奶牛和A2型奶牛。A1β-酪蛋白和A2β-酪蛋白的蛋白质结构区别主要是第67位的氨基酸不同。通过消化酶的作用，A1β-酪蛋白可能产生β-酪啡肽-7(BCM-7)，而A2β-酪蛋白不会产出或很少产出β-酪啡肽-7(BCM-7)。BCM-7是一种外啡肽，可与机体多种系统相互作用。多项研究表明，A1β-酪蛋白或BCM-7与部分婴儿的I型糖尿病风险升高，免疫反应功能性障碍、消化功能紊乱、呼吸功能障碍以及易得自闭症之间存在关联。另有研究表明，A2β-酪蛋白不仅不会生成BCM-7，而且与母乳中的β-酪蛋白相似，更有利于促进婴幼儿的生长发育。

目前对于A1β-酪蛋白、A2β-酪蛋白的检测，常用的检测方法有快速检测法和仪器检测法。

快速检测法有试剂盒检测法、乳品分析仪快速检测法等。此类检测方法检测速度快，但不能对样品中的A2β-酪蛋白做定量分析，其主要用于对A2β-酪蛋白的奶源筛选鉴别，作为奶源掺假筛查使用的较多。仪器检测方法有反相高效液相色谱法(RP-HPLC)、等电聚焦电泳(IEF)法和等位基因特异性聚合酶链式反应(AS-PCR)、单链构象多态性聚合酶链式反应(SSCP-PCR)等，此类检测方法能对A2β-酪蛋白做定量分析，但检测时间较长。

发明内容

为解决上述现有技术中的牛乳及其制品中A1β-酪蛋白、A2β-酪蛋白的检测时间长，难以对A2β-酪蛋白做定量分析的问题，本发明提供了一种牛乳及其制品中A1β-酪蛋白、A2β-酪蛋白的测定方法。

本发明的技术方案：一种牛乳及其制品中A1β-酪蛋白、A2β-酪蛋白的测定方法，所述测定方法包括以下步骤：

(1)配制β-酪蛋白标准溶液；

(2)配制第一试剂、第二试剂以及流动相；

(3)对奶样进行前处理：乳品试样溶解后，吸取乳品试样加入第一试剂，混匀静止后离心处理，除去表层乳脂，取底层溶液加入第二试剂，混匀，备用；

(4)采用液相色谱仪对步骤(3)前处理完成的乳品试样进行分离，根据出峰顺序确定A1β-酪蛋白、A2β-酪蛋白；

(5)计算A1β-酪蛋白、A2β-酪蛋白的含量。

所述步骤(1)中配制β-酪蛋白标准溶液的操作为：将β-酪蛋白标准物质分成小片絮状后放入容器中加入水溶解，制成β-酪蛋白标准溶液。

所述步骤(2)中的第一试剂，以重量份计包括：

双-三羟甲基氨基甲烷0.2-0.25份；

盐酸胍5.70-5.80份；

柠檬酸钠0.013-0.015份；

二硫苏糖醇0.025-0.035份。