[发明专利]用于非小细胞肺癌CYFRA21-1检测的电化学免疫传感器及检测方法

说明书

本发明提供了一种用于非小细胞肺癌CYFRA21‑1检测的电化学免疫传感器，将PCN222(Fe)/AuNPs用于构建免疫传感器来检测CYFRA21‑1，显示出较强的信号放大作用。本发明生物传感器以MB为电活性物质，以KB/PEI‑AuNPs为传感界面，一方面增加了电极的导电性，另一方面能固载更多的捕获探针，与信号探针通过Ab₁‑Ag‑Ab₂特异性结合构建三明治夹心型传感器，通过类芬顿反应破坏MB，实现对CYFRA21‑1的高灵敏检测。本发明检测方法具有线性范围宽、特异性强、分析时间短，稳定性和重现性好等优点，适合大面积推广应用。

技术领域

本发明涉及电化学检测技术领域，具体涉及以金纳米粒子修饰的锆基金属有机框架、CYFRA21-1电化学免疫传感器的制备方法及检测方法。

背景技术

原发性支气管肺癌（Primary bronchial lung cancer）简称肺癌（Lung Cancer），是指原发于气管、支气管和肺的恶性肿瘤。据流行病学调查研究显示，肺癌是全球发病率和病死率最高的恶性肿瘤，多好发于男性，且发病率和病死率均居首位；而在女性人群中，其发病率仅次于乳腺癌居第2位，病死率仍位居首位。肺癌根据其分化程度、形态特征和生物学特点主要分为小细胞肺癌（small cell lung cancer, SCLC）和非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）两种主要亚型。而大约85%的肺癌被归类为非小细胞肺癌(NSCLC)，主要包括鳞状细胞癌(SCC)、肺腺癌(LAD)和大细胞癌(LCC)。肺癌是所有癌症中死亡率最高的，且肺癌的预后很差，由于75％的患者在就诊时已是晚期，故三年生存率低于20％。因此，针对非小细胞肺癌采取有效的早期诊断方法具有重要意义。

目前，检测 NSCLC的方法主要包括基因诊断、放射性核素扫描 、计算机断层扫描（CT）、磁共振成像（MRI）和正电子发射断层扫描（PET）、超声内镜检查纵隔镜、胸腔镜的检查痰细胞学检查等。然而，这些方法通常需要专门的大型仪器、专业的操作人员、高费用和长时间，这限制了在初级医疗机构和发展中国家对NSCLC的早期诊断。因此，需要寻找一种快速、简便和经济的方法辅助诊断肺癌，提高肺癌的确诊率。

研究发现，细胞角蛋白片段19抗原21-1 CYFRA21-1在非小细胞肺癌早期诊断中具有临床意义。在血清CYFRA21-1水平＞3.3 ng/mL即可诊断为NSCLC。电化学免疫传感器是利用抗原和抗体间的高度特异性结合的原理，将免疫分析法和电化学传感技术相结合构建而成的一项新方法，因为传感器具有灵敏度高、分析速度快、操作简便、低成本、低能耗等特点，被广泛应用于临床诊断领域。现今，基于免疫分析法结合免疫传感器的研制成为检测肿瘤标志物的技术。大量研究用于研发操作简便易行的传感器。寻求一种更加简便，灵敏度更高，选择性更好的检测方法仍然是现代医学检验和生物医学研究领域的研究热点。

发明内容

为了解决现有技术中的问题，本发明提供一种用于非小细胞肺癌CYFRA21-1检测的电化学免疫传感器。

除特殊说明外，本发明所述份数均为重量份，所述百分比均为质量百分比。

为实现上述目的，本发明的技术方案为：

一种用于非小细胞肺癌CYFRA21-1检测的电化学免疫传感器，其特征在于，

所述构建用于非小细胞肺癌CYFRA21-1检测的电化学免疫传感器的方法为：将MB/PEI溶液滴加到清洁的玻碳电极表面上，室温干燥后再将KB/PEI-AuNPs分散液滴加到电极表面，室温干燥，将Ab₁滴加在电极上，4-5℃冰箱过夜孵育12-13h；用DEPC水冲洗干净后滴加1% 牛血清蛋白（BSA）溶液4-5℃孵育40-45 min；最后将获得的电极用DEPC水冲洗干净后，滴加PCN222(Fe)/AuNPs/Ab₂信号探针溶液于室温孵育1-2h，即得到用于CYFRA21-1检测的电化学免疫传感器；