[发明专利]一种鉴别结直肠癌中医证型的构建方法

权利要求书

1.一种结直肠癌中医证型鉴别模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

提供结直肠癌湿热蕴结证、瘀毒内阻证、脾虚气滞证、肝肾阴虚证、气血两虚证血清样本；将待检血清样本采用LC-MS血清代谢组学技术进行分析，得到待检血清样本的原始代谢指纹图谱；将原始代谢指纹图谱进行图谱预处理，得到可以用于统计分析的代谢物信息；将每组差异代谢物信息导入血清代谢组学分析模型中，找出该代谢物信息在血清代谢组学分析模型中的位置，用于分析待检血清样本的代谢组学情况；

所述血清代谢组学分析模型的构建方法包括以下步骤：

(1)收集结直肠癌湿热蕴结证、瘀毒内阻证、脾虚气滞证、肝肾阴虚证、气血两虚证血清样本，作为分析样本；

(2)将每个分析样本采用LC-MS血清代谢组学技术进行分析，得到原始代谢指纹图谱；

(3)将原始代谢指纹图谱进行图谱预处理，进行主成分分析和偏最小二乘判别分析，得OPLS-DA模型，对得到的OPLS-DA模型进行验证，无过拟合危险，则所得OPLS-DA模型即为鉴别结直肠癌中医证型的血清代谢组学分析模型。

2.根据权利要求1所述的一种结直肠癌中医证型鉴别模型的构建方法，所述的构建鉴别结直肠癌中医证型血清代谢组学分析模型或对待检血清样本进行LC-MS血清代谢组学技术进行分析时，液相色谱所用色谱柱为HSST31.8μm(2.1×150mm)色谱柱，自动进样器温度设为8℃，以0.25mL/min的流速，40℃的柱温，进样2μL进行梯度洗脱，流动相为正离子0.1％甲酸水(C)-0.1％甲酸乙腈(D)；负离子5mM甲酸铵水(A)-乙腈(B)；梯度洗脱程序为0～1min，2％B/D；1～9min，2％～50％B/D；9～12min，50％～98％B/D；12～13.5min，98％B/D；13.5～14min，98％～2％B/D；14～20min，2％D-正模式(14～17min，2％B-负模式)。

3.根据权利要求1所述的一种结直肠癌中医证型鉴别模型的构建方法，所述的构建鉴别结直肠癌中医证型血清代谢组学分析模型或对待检血清样本进行LC-MS血清代谢组学技术进行分析时，质谱检测仪器使用电喷雾离子源(ESI)，正负离子电离模式，正离子喷雾电压为3.50kV，负离子喷雾电压为2.50kV，鞘气30arb，辅助气10arb。毛细管温度325℃，以分辨率70000进行全扫描，扫描范围100～1000，并采用HCD进行二级裂解，碰撞电压为30eV，同时采用动态排除去除无必要的MS/MS信息。

4.根据权利要求1所述的一种结直肠癌中医证型鉴别模型的构建方法，其特征是：所述OPLS-DA模型的自变量的可解释度(R2X)为0.281cum，因变量的可解释度(R2Y)为0.977cum，模型的可预测度(Q2)为0.692cum。

5.根据权利要求1所述的一种结直肠癌中医证型鉴别模型的构建方法，其特征是：构建血清代谢组学分析模型时，所述不同证型结直肠癌患者血清样本均来自36-88岁人群。

6.根据权利要求1所述的一种结直肠癌中医证型鉴别模型的构建方法，其特征是：构建血清代谢组学分析模型时，所述不同证型血清样本109个。

7.根据权利要求1所述的一种结直肠癌中医证型鉴别模型的构建方法，其特征是：构建血清代谢组学分析模型时，进行LC-MS血清代谢组学技术分析时，在检测时利用质量控制(QC)样本进行质控，所述质量控制样品为我们从每个待测样品中提取20μL，并将其混合为QC样品。