[发明专利]一种猪用液态菌酶协同饲料添加剂的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种猪用液态菌酶协同饲料添加剂的制备方法，其特征在于，该添加剂是由有益菌、活性酶、酶保护剂、菌保护剂、稳定剂和无菌水混合均匀制成，包括以下步骤：

（1）、制备种子液：

将有益菌接种到种子液培养基中，34～37℃培养18～24h复壮，制备成有效活菌数≥1×10⁸CFU/mL的种子液；

所述的有益菌为植物乳杆菌、乳酸片球菌、粪肠球菌、地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、丁酸梭状芽孢杆菌、酿酒酵母中的一种或其任意比的混合物；

所述的种子液培养基为MRS培养基，是由10g蛋白陈、5g牛肉粉、4g酵母粉、2g葡萄糖、1mL吐温80、2g磷酸氢二钾、5g乙酸钠、2g柠檬酸三铵、0.2g硫酸镁、0.05g硫酸锰和15g琼脂粉加入1000mL蒸馏水中，加热溶解，调节pH6，121℃高压灭菌15～20分钟制成；

（2）、制备发酵液：

将种子液接种于优化的发酵培养基中，接种量均为发酵培养基体积的2～5%，34～37℃培养16～24h，发酵液中的残糖为0～3g/L，有益菌的活菌数≥2.4×10⁹/mL；

所述的优化后的发酵培养基是由重量百分比的：红糖或糖蜜2～5%、酵母浸粉1～1.8%、磷酸氢二钾0.18～0.25%、硫酸镁0.001～0.003%和吐温-80 0.08～0.1%，加无菌水至100%制成；

（3）、制备活性酶：

所述的活性酶为纤维素酶、木聚糖酶、β-葡聚糖酶、植酸酶、果胶酶、β-甘露聚糖酶、α-半乳糖苷酶中的一种或两种以上的混合物，分别加无菌水制成800～1000U/L的纤维素酶、1500～1800U/L的木聚糖酶、500～800U/L的β-葡聚糖酶、500～800U/L的植酸酶、800～1500U/L的果胶酶、400～1000U/L的β-甘露聚糖酶、80～200U/L的α-半乳糖苷酶；

（4）、混配制成猪用液态菌酶协同饲料添加剂：

将有益菌、活性酶、酶保护剂、菌保护剂和稳定剂加入无菌水，混配均匀，制成猪用液态菌酶协同饲料添加剂，方法是：

首先以无菌水为载体，加入饲料添加剂质量20～50%的菌保护剂，再加入饲料添加剂质量0.1～0.3%的酶保护剂，加入饲料添加剂质量0.05～0.25%的稳定剂，制成饲料添加剂基础液；再加入有益菌，使有益菌浓度≥4×10⁸CFU/mL，然后加入活性酶，使饲料添加剂中活性酶的活力为80～1800U/L，用磷酸盐缓冲液调pH5-6，即成猪用液态菌酶协同饲料添加剂；

所述的酶保护剂为EDTA；

所述的菌保护剂为甘油、海藻糖、壳聚糖、低聚果糖、低聚异麦芽糖或其任意比的混合物；

所述的稳定剂为海藻酸钠、黄原胶、瓜尔胶、卡拉胶或其任意比的混合物。

2.根据权利要求1所述的猪用液态菌酶协同饲料添加剂的制备方法，其特征在于，该添加剂是由无菌水作载体，加入添加剂总重量：20%甘油、0.2%海藻酸钠、0.05%黄原胶、0.2%EDTA混合在一起，加入有效活菌数≥1×10⁸CFU/mL的植物乳杆菌、乳酸片球菌和粪肠球菌种子液，使活菌数达到4×10⁸CFU/mL，再加入纤维素酶900U/L、植酸酶650U/L、β-葡聚糖酶700U/L、木聚糖酶1600U/L，添加无菌水至100%，混匀，用磷酸盐缓冲液调pH5.5，即成猪用液态菌酶协同饲料添加剂。

3.根据权利要求1所述的猪用液态菌酶协同饲料添加剂的制备方法，其特征在于，该添加剂是由无菌水作载体，加入添加剂总重量：20%甘油、30%海藻糖、0.1%海藻酸钠、0.05%黄原胶、0.1% EDTA混合在一起，加入有效活菌数≥1×10⁸CFU/mL的植物乳杆菌、乳酸片球菌和粪肠球菌种子液，使活菌数达到4×10⁸CFU/mL，再加入β-甘露聚糖酶700U/L、果胶酶1100U/L、α-半乳糖苷酶140U/L，添加无菌水至100%，混匀，用磷酸盐缓冲液调pH6.0，制成猪用液态菌酶协同饲料添加剂。