[发明专利]一种柑橘溃疡病诱导转录因子酵母文库、构建方法及其应用

权利要求书

1.一种柑橘溃疡病诱导转录因子酵母文库，其特征在于，文库包含的转录因子为柑橘溃疡病诱导的转录因子，为柑橘在溃疡病诱导后的差异表达基因。

2.根据权利要求1所述的一种柑橘溃疡病诱导转录因子酵母文库，其特征在于，文库包括的转录因子如表1所示：

3.一种引物序列，其特征在于，用于构建权利要求1或2所述的一种柑橘溃疡病诱导转录因子酵母文库，引物序列如表2所示：

4.一种柑橘溃疡病诱导转录因子的筛选方法，其特征在于，用于筛选权利要求1或2所述的一种柑橘溃疡病诱导转录因子酵母文库中的转录因子，包括以下步骤：

差异表达转录因子筛选自柑橘溃疡病抗性品种金柑和溃疡病感病品种晚锦橙在溃疡病诱导的转录组。

5.根据权利要求4所述的一种柑橘溃疡病诱导转录因子的筛选方法，其特征在于，包括向金柑和晚锦橙样本，注射接种柑橘溃疡病菌菌液，取接种部位材料，进行转录组测序和基因差异表达分析，根据柑橘溃疡病侵染和对照诱导间基因表达量的比值，结合基因功能注释获得差异转录因子。

6.根据权利要求4所述的一种柑橘溃疡病诱导转录因子的筛选方法，其特征在于，还包括引物设计的方法：包括根据差异转录因子在数据库中的全长编码序列设计引物，其末端加上与AD载体末端的互补序列。

7.一种柑橘溃疡病诱导转录因子酵母文库的构建方法，其特征在于，包括：

步骤1，基因克隆和均一化；

步骤2，载体构建和转化，获得柑橘溃疡病诱导转录因子文库。

8.根据权利要求7所述的一种柑橘溃疡病诱导转录因子酵母文库的构建方法，其特征在于，步骤1中包括步骤：以权利要求3或6记载的引物和柑橘溃疡病菌处理的金柑和晚锦橙叶片的混合cDNA作为模板进行PCR扩增，胶回收产物后进行二次扩增，得到转录因子扩增条带，胶回收产物。

9.根据权利要求7所述的一种柑橘溃疡病诱导转录因子酵母文库的构建方法，其特征在于，步骤2中包括步骤：步骤1中的PCR产物混合，与利用EcoRI和BamHI线性化的酵母单双杂交AD载体进行同源重组，连接产物转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，获得含酵母文库质粒的阳性克隆。

10.一种柑橘溃疡病诱导转录因子酵母文库的应用，其特征在于，文库用于酵母双杂交和/或单杂交筛库，获得目标蛋白的与柑橘溃疡病相关的上游转录因子和/或互作转录因子。