[发明专利]一种抗凝全血法鉴定鸡性连锁矮小基因缺失突变基因型的分子检测方法及其应用

权利要求书

1.一种抗凝全血法鉴定鸡性连锁矮小基因缺失突变基因型的引物组合，其特征在于，包括：

DW-NOR-F：GGCAGAAACCCCAAGTATG；

DW-MUT-F：TGACGTGAACAGAAGTGCATGAC；

DWDR：TCGGGACAGATCAAAGACAAT。

2.一种抗凝全血法鉴定鸡性连锁矮小基因缺失突变基因型的试剂盒，其特征在于，包含权利要求1所述的引物组合。

3.一种抗凝全血法鉴定鸡性连锁矮小基因缺失突变基因型的方法，其特征在于，包括以下步骤：

以鸡抗凝全血裂解液为模板，利用权利要求1所述的引物组合或权利要求2所述的试剂盒进行PCR扩增反应，对扩增产物凝胶电泳后进行辨别，若电泳结果只出现一条484bp的条带，则为非性连锁矮小基因缺失突变纯合子，基因型为DD，若电泳结果只出现一条252bp条带，则为性连锁矮小基因缺失突变纯合子，基因型为dd，若电泳结果出现一条484bp条带和一条252bp条带，则为携带性连锁矮小基因缺失突变的杂合子，基因型为Dd。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述鸡抗凝全血裂解液由鸡抗凝全血与裂解液在95℃孵育3min。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述鸡抗凝全血与所述裂解液的体积比为1:10。

6.根据权利要求3-5任一项所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增的反应条件为：95℃预变性3min；95℃变性15s，56℃退火20s，72℃延伸60s，35个循环，72℃最终延伸8min，4℃保存。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述扩增反应体系为：血液样本PCR预混液5μL、鸡抗凝全血裂解液1μL、DW-MUT-F和DW-NOR-F引物各0.2μL、DWDR引物0.4μL和双蒸水3.2μL。

8.一种权利要求1所述的引物组合或权利要求2所述的试剂盒在鉴定鸡性连锁矮小缺失突变基因型中的应用。

9.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述引物组合或所述试剂盒中引物DW-MUT-F和DWDR用于非性连锁矮小缺失突变等位基因的检测，引物DW-NOR-F和DWDR用于性连锁矮小缺失突变等位基因的检测。