[发明专利]一种总胆汁酸检测试剂盒及其制备方法和检测方法

说明书

本发明涉及生物检测技术领域，具体涉及一种总胆汁酸检测试剂盒及其制备方法和检测方法，包括以两性离子缓冲液、叠氮化钠、非离子表面活性剂、氯化钠、二元醇、乙二胺四乙酸二钠盐和硫代氧化型辅酶为原料制备第一试剂；以咪唑、烷基乙醇胺、叠氮化钠、甘氨酸、聚乙二醇、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸钠盐和3α‑羟基类固醇脱氢酶为原料制备第二试剂；对第一试剂和第二试剂进行组合，得到总胆汁酸检测试剂盒，总胆汁酸检测试剂盒在2℃～8℃避光密封条件下保存，有效期为12个月；在2℃～8℃下开盖状态使用效期为30天，试剂无明显影响，性能稳定，从而解决现有的总胆汁酸检测试剂保存及开盖使用状态下稳定性差的问题。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，尤其涉及一种总胆汁酸检测试剂盒及其制备方法和检测方法。

背景技术

胆汁酸是胆固醇在肝脏分解及消化道带着产物。当肝细胞病变或肝内外阻塞时，胆汁酸代谢发生障碍反流入血，血清总胆汁酸浓度升高，因此血清中的胆汁酸水平反映了肝实质性损伤的重要证据，对肝炎、乙醇肝损伤、肝硬化等肝病诊断具有重要意义。

目前市售的总胆汁酸试剂盒主要采用第五代循环酶法，其原理为血清中胆汁酸被3α-羟类固醇脱氢酶及β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型特异性地氧化，生成3-酮类固醇及β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型。此外，生成的3- 酮类固醇在3α-HSD及β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型作用下，生成胆汁酸及β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型。血清中微量的胆汁酸在多次酶循环过程中被放大，同时可使生成的Thio-NADH扩增。在405nm处测定Thio-NADH 吸光度变化值，以求得血清中TBA的含量。该方法具有灵敏度高、对生化仪器管道无污染及检测快速等优点，但也存在抗干扰性能不强且2～8℃保存不稳定，特别是开盖使用状态下稳定性较差的缺点。

发明内容

本发明的目的在于提供一种总胆汁酸检测试剂盒及其制备方法和检测方法，旨在解决现有的总胆汁酸检测试剂保存稳定性差的问题。

为实现上述目的，第一方面，本发明提供了一种总胆汁酸检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：

以两性离子缓冲液、叠氮化钠、非离子表面活性剂、氯化钠、二元醇、乙二胺四乙酸二钠盐和硫代氧化型辅酶为原料制备第一试剂；

以咪唑、烷基乙醇胺、叠氮化钠、甘氨酸、聚乙二醇、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸钠盐和3α-羟基类固醇脱氢酶为原料制备第二试剂；

对所述第一试剂和所述第二试剂进行组合，得到总胆汁酸检测试剂盒。

其中，所述以两性离子缓冲液、叠氮化钠、非离子表面活性剂、氯化钠、二元醇、乙二胺四乙酸二钠盐和硫代氧化型辅酶为原料制备第一试剂的具体方式为：

使用纯化水分别对两性离子缓冲液、叠氮化钠、非离子表面活性剂、氯化钠、二元醇、乙二胺四乙酸二钠盐和硫代氧化型辅酶进行溶解，得到第一溶解液；

使用盐酸或氢氧化钠溶液对所述第一溶解液的pH值进行调节，得到第一调节液；

使用纯化水对所述第一调节液进行稀释后静置，然后使用尼龙滤膜进行过滤，得第一试剂。

其中，所述以咪唑、烷基乙醇胺、叠氮化钠、甘氨酸、聚乙二醇、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸钠盐和3α-羟基类固醇脱氢酶为原料制备第二试剂的具体方式为：

使用纯化水分别对咪唑、烷基乙醇胺、叠氮化钠、甘氨酸和聚乙二醇进行溶解，得到第二溶解液；

使用盐酸或氢氧化钠溶液对所述第二溶解液的pH值进行调节，得到第二调节液；

使用所述第二调节液分别对还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸钠盐和3α-羟基类固醇脱氢酶进行溶解，得到第三溶解液；

使用纯化水对所述第三溶解液进行稀释后静置，然后使用尼龙滤膜进行过滤，得第二试剂。