[发明专利]小分子化合物在肾源细胞培养中的应用

说明书

本发明公开了小分子化合物在肾源细胞的培养中的应用。所述的肾源细胞包括肾小管上皮细胞和来源于肾脏的尿源细胞。本发明发现Corydaline、ARN2966、PKG drug G1、Succinobucol、Meptyldinocap、Rifamycin sodium salt、Carnosic acid、TBHQ、C188‑9、Buparvaquone能够维持原代人肾小管上皮细胞长期培养，提高细胞活力。还发现了Corydaline、ARN2966、PKG drug G1对于来源于肾的尿源性细胞有明显的提高细胞活力作用，甚至是促增殖作用，可以保证在较早代数即可获得数量更多的尿源性细胞。

技术领域

本发明属于细胞培养领域，具体涉及一种小分子化合物在原代人肾源细胞培养中的应用。

背景技术

据报道，在人类尿液中可检测到3000多种化学物质(部分为代谢产物)，此外，尿液中还存在一些从血液或组织(主要是肾脏)中脱落的细胞，人体尿液中比较常见的细胞有红细胞、白细胞(淋巴细胞、单核细胞及嗜酸性粒细胞等)、移行上皮细胞、鳞状上皮细胞和肾小管上皮细胞等。尿中所见上皮细胞从肾小管、肾盂、输尿管、膀胱、尿道等处脱落。

近年的研究报告指出，在尿液中还发现了一类细胞群，具有干细胞的生物学特性和分化潜能，称之为尿源性干细胞(urine－derived stem cells，USC)。在不同诱导因子的作用下，USC能分化为成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞、尿路上皮细胞、平滑肌细胞、骨骼肌细胞、心肌细胞等多种组织。

因为尿源细胞的获取是无创，而且细胞数量相对较多，所以被广泛研究用于再生医学，如将尿液细胞直接重编程为神经干细胞(Nature Methods,doi:10.1038/nmeth.2283)；如诱导尿液细胞来源的多能干细胞分化为上皮样的膜状结构，取代再生牙齿的构建必须得上皮组织(Cell Regeneration,doi:10.1186/2045-9769-2-3)。

原代细胞最接近起源组织。它们直接从组织中取出并经过处理，以在最佳培养条件下建立。由于它们源自组织且未经修饰，因此与体内状态更加相似，并表现出正常的生理学特征。因此，它们为研究细胞的正常生理学和生物化学性质(例如，代谢研究、衰老、信号传导研究)以及药物和有毒化合物对细胞的作用，提供了出色的模型系统。但须记住，原代细胞的寿命有限，经过一定次数的细胞分裂后将停止分裂(或衰老)，比连续细胞系更难以培养和维持。

研究中最常用的原代细胞类型是上皮细胞、成纤维细胞、角质形成细胞、黑素细胞、内皮细胞、肌肉细胞、造血和间充质干细胞。最初的培养物是异质的(即组织中存在多种细胞类型的混合物)，只能在有限的时间范围内在体外进行培养。肾小管上皮细胞是指肾小管的外面的一层细胞。原代肾小管上皮细胞不建议传代，因为随着传代培养的次数增加，或者培养时间过长，细胞活力会严重下降。

原代细胞用于制备细胞药物(细胞疗法)，细胞数量必需满足治疗要求，但原代细胞传代次数一般不超过10代，在有限的代数下大量扩增细胞，难度大。肾源细胞(来源于肾脏的细胞)没有较稳定的生长速率，大量扩增细胞后，其原代细胞的代数也已偏高，细胞活力下降，也不利于细胞治疗。因此，需要使用可提高肾源细胞增殖能力的小分子药物处理尿源性细胞，保证在较早代数即可获得数量更多的尿源性细胞。

发明内容

本发明的目的在于提供有利于维持肾源细胞(来源于肾的细胞)的体外长期培养，提高其细胞活力，甚至促进其细胞增殖的小分子化合物。这些小分子化合物包括Corydaline、ARN2966、PKG drug G1、Succinobucol、Meptyldinocap、Rifamycin sodiumsalt、Carnosic acid、TBHQ、C188-9、Buparvaquone中的至少一种。

本发明所采取的技术方案是：