[发明专利]一种诱导细胞分泌细胞外基质的方法及其应用在审
| 申请号： | 202211143637.7 | 申请日： | 2022-09-20 |
| 公开（公告）号： | CN115478044A | 公开（公告）日： | 2022-12-16 |
| 发明（设计）人： | 陈嘉欣;林凯欣;赵喜;郑立新;王恒;邱江 | 申请（专利权）人： | 广州华越肾科再生医学科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0735 | 分类号： | C12N5/0735;C12N5/074;A61K8/99;A61K35/28;A61Q19/00 |
| 代理公司： | 广州嘉权专利商标事务所有限公司 44205 | 代理人： | 薛建强 |
| 地址： | 510700 广东省广州市黄埔区广州国际生物*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 诱导 细胞 分泌 基质 方法 及其 应用 | ||
1.一种诱导干细胞分泌细胞外基质的方法，包括如下步骤：
(1)在基质胶包被细胞培养容器中使用TeSR1培养基培养细胞；
(2)更换为含有GSK-3α/β抑制剂的细胞培养基培养20～48h；
(3)更换为含有维A酸和成纤维生长因子2的细胞培养基培养20～48h；
(4)更换为含有激活素A和成纤维生长因子9和的细胞培养基培养至少1d，即得细胞外基质。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述干细胞包括人源干细胞；优选包括人多能干细胞和人胚胎干细胞。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述GSK-3α/β抑制剂为CHIR99021，其在细胞培养基中的终浓度为5～15μM。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述维A酸在细胞培养基中的终浓度为1～10μM，所述成纤维生长因子2在细胞培养基中的终浓度为50ng-200ng/mL。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)中，所述激活素A在细胞培养基中的终浓度为1～10ng/mL，所述成纤维生长因子9在干细胞培养基中的终浓度为50ng-200ng/mL。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)～步骤(4)中所述细胞培养基包括RPMI 1640培养基。
7.一种细胞外基质，其特征在于，利用权利要求1～6任一项所述的方法得到的细胞外基质。
8.根据权利要求7所述的细胞外基质，其特征在于，所述细胞外基质中含有胶原蛋白、层粘连蛋白和蛋白聚糖。
9.权利要求7～8任一项所述的细胞外基质在制备含有胶原蛋白、层粘连蛋白和/或蛋白聚糖产品中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述产品包括药品、食品和化妆品。
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