[发明专利]用于检测可溶性细胞因子受体的试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种用于检测可溶性细胞因子受体的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括至少四种捕获抗体和至少四种检测抗体，所述至少四种捕获抗体包括抗人sCD25抗体、抗人sCD40L抗体、抗人sCD130抗体和抗人sTREM-1抗体，所述至少四种检测抗体包括抗人sCD25抗体、抗人sCD40L抗体、抗人sCD130抗体和抗人sTREM-1抗体。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括样品稀释液、洗涤缓冲液、校准品、质控品和基质B，所述基质B包括牛血清白蛋白、胎牛血清和甘氨酸，所述样本稀释液包括4-羟乙基哌嗪乙磺酸、氯化钠和胎牛血清，所述洗涤缓冲液包括磷酸盐和牛血清白蛋白，所述校准品包括sCD25蛋白、sCD40L蛋白、sCD130蛋白和sTREM-1蛋白，所述质控品包括含有sCD25蛋白、sCD40L蛋白、sCD130蛋白和sTREM-1蛋白的冻干品。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括微球和生物素，每个所述微球与一种所述捕获抗体结合形成包被有抗体的微球，每份所述生物素与一种所述检测抗体偶联形成生物素偶联抗体。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括荧光试剂，所述荧光试剂为链霉亲和素与藻红蛋白偶联物。

5.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述包被有抗体的微球中微球与抗体包被比例为每10⁶个微球上包被10-30ug抗体。

6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括固相载体，所述捕获抗体固定于所述固相载体上。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述固相载体包括酶标板微孔、磁珠、亲和膜或液相芯片，所述液相芯片包括微球。

8.一种权利要求1所述试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：将包被有抗人sCD25抗体的聚苯乙烯微球、包被有抗人sCD40L抗体的聚苯乙烯微球、包被有抗人sCD130抗体的聚苯乙烯微球和包被有抗人sTREM-1抗体的聚苯乙烯微球混合，配制成捕获微球混合液；

S2：在抗人sCD25抗体、抗人sCD40L抗体、抗人sCD130抗体、抗人sTREM-1抗体中分别加入生物素，分别控制抗体与生物素的摩尔比均为1:10-1:40，在室温下孵育4-6小时后，得到生物素偶联的抗人sCD25抗体、生物素偶联的抗人sCD40L抗体、生物素偶联的抗人sCD130抗体和生物素偶联的抗人sTREM-1抗体；

S3：将所述生物素偶联的抗人sCD25抗体、生物素偶联的抗人sCD40L抗体、生物素偶联的抗人sCD130抗体和生物素偶联的抗人sTREM-1抗体混合，配制成生物素偶联抗体混合液。

9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述包被有抗人sCD25抗体的聚苯乙烯微球、包被有抗人sCD40L抗体的聚苯乙烯微球、包被有抗人sCD130抗体的聚苯乙烯微球和包被有抗人sTREM-1抗体的聚苯乙烯微球的制备包括，在若干份不同的荧光微球中加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺和不同抗体后，在室温下反应4-6小时，然后清洗得到的微球以去除多余抗体后加入脱脂奶粉封闭20-40分钟，然后去除所述脱脂奶粉，以分别得到不同微球，其中，控制向不同份荧光微球分别加入的不同抗体分别为sCD25抗体、sCD40L抗体、sCD130抗体和sTREM-1抗体，使得到的不同微球分别为包被有抗人sCD25抗体的聚苯乙烯微球、包被有抗人sCD40L抗体的聚苯乙烯微球、包被有抗人sCD130抗体的聚苯乙烯微球和包被有抗人sTREM-1抗体的聚苯乙烯微球。

10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，控制制备所述不同微球所使用的各荧光微球的荧光强度各不相同。