[发明专利]用于检测可溶性细胞因子受体的试剂盒及其制备方法

说明书

本发明提供了一种用于检测可溶性细胞因子受体的试剂盒，所述试剂盒包括至少四种捕获抗体和至少四种检测抗体，所述至少四种捕获抗体包括抗人sCD25抗体、抗人sCD40L抗体、抗人sCD130抗体和抗人sTREM‑1抗体，所述至少四种检测抗体包括抗人sCD25抗体、抗人sCD40L抗体、抗人sCD130抗体和抗人sTREM‑1抗体。本发明的试剂盒能够同时检测sCD25、sCD40L、sCD130、sTREM‑1四种细胞因子，可以提高检测的准确性。

技术领域

本发明涉及蛋白检测技术领域，尤其涉及一种用于检测可溶性细胞因子受体的试剂盒及其制备方法。

背景技术

可溶性细胞因子受体(SCR)是缺乏跨膜区的受体细胞外部分的循环蛋白。SCRs是调节细胞因子及淋巴运动的正常体液组成之一。第一个被定义的SCR是可溶性白介素2受体(sIL-2R，即sCD25)可调节IL-2家族的细胞因子活性。可溶性白细胞介素-2受体(solubleinterleukin-2receptor,sCD25/sIL-2R)是一种可溶性的细胞因子受体，正常人体内可少量表达，主要来源于激活的淋巴细胞(包括B淋巴细胞和T淋巴细胞)。机体病态时，过多活化的淋巴细胞或肿瘤细胞大量释放sCD25。血清sCD25水平在多种疾病的临床进程中明显升高，如恶性肿瘤、自身免疫性疾病、感染性疾病及某些传染病等。噬血细胞综合征(HLH)患者体内过度活化的巨噬细胞和T淋巴细胞导致血清sCD25水平明显升高，因而HLH-2004指南中规定血清sCD25≥2400U/ml是HLH的重要诊断标准之一。以往的研究侧重于sCD25在HLH诊断方面的价值。在免疫激活相关的疾病，如自身免疫性疾病、感染和肿瘤等患者的血清中sIL-2Rs水平显著增加。在某些免疫性疾病中可以观察到sIL-2R水平与疾病进展呈正相关关系。

CD40是Ⅰ型跨膜蛋白，属于肿瘤坏死因子受体(TNFR)超家族成员。CD40L是CD40的配体，属Ⅱ型跨膜蛋白，TNF家族细胞因子。CD40L还以可溶型分子形式(sCD40L)存在，血液循环系统中约95％的sCD40L来自于活化的血小板。在动脉粥样硬化(AS)病变区CD40、CD40L过度表达，CD40-CD40L的相互作用参与了AS发生、发展乃至斑块破裂，血栓形成的过程。

CD130亦称gp130是一种分子量为130kD的跨膜糖蛋白,它是白介素6(IL-6)、LIF、抑瘤素(OSM)、睫状神经营养因子(CNTF)、IL-11和心肌营养因子-l(CT-1)共同的受体和信号转导子,上述因子也因此归为IL-6家族细胞因子。有研究表明，在糖尿病视网膜病变患者血清中sCD130水平较正常组织有显著升高，且与IL-6和sIL-6R水平显著正相关。

sTREM-1为TREM-1的可溶性形式，存在于血浆、胃液、尿液等体液中。sTREM-1的分子质量根据其细胞来源不同而不同，来源于骨髓细胞和单核细胞的分子质量为17.5kDa，来源于中性粒细胞的为15kDa。目前对于sTREM-1的起源存在两种观点:一种认为其是由TREM-1mRNA的剪接变异体(缺乏跨膜区和胞内区编码的mRNA)编码而成，另一种认为其是基质金属蛋白酶将TREM-1胞外区水解释放后形成的产物。体液中sTREM-1与组织中TREM-1表达具有一致性。胰腺炎大鼠模型中，血清和腹水sTREM-1表达以及胰腺、肝、肾组织中TREM-1表达均明显升高，且两者存在一致性。但两者对炎症的调节作用并不同。TREM-1可放大炎症反应，而sTREM-1可减弱炎症反应。Baruah等使用TREM-1激动剂处理体外人中性粒细胞，并使用外源sTREM-1进行干预，发现下游炎症因子IL-1β释放减少。

目前，市面上定量检测可溶性细胞因子受体的产品主要方法学有酶联免疫法、化学发光免疫分析法。酶联免疫法较为常见，但其手工操作步骤繁琐，所需的血清量大，结果重复性差。化学发光免疫分析法虽操作简单，灵敏度高，但其化学发光物质不稳定，易水解。目前可溶性细胞因子sCD25、sCD40L、sCD130、sTREM-1受体检测技术中一般都是单指标检测，试剂灵敏度、精密度等性能欠佳，且检测时间长、操作复杂，因此亟需一种能够同时检测出这四种标志物的性能优良的试剂。