[发明专利]谷氨酸脱氢酶启动子突变体及其应用

权利要求书

1.一种具有启动子活性的多核苷酸，特征在于，所述多核苷酸选自如下任一项：

（i）如SEQ ID NO：2所示的核苷酸；

（ii）包含与（i）所示的核苷酸序列的反向互补序列的多核苷酸；

（iii）包含在高严格性杂交条件或非常高严格性杂交条件下，能够与（i）或（ii）所示的核苷酸序列杂交的序列的反向互补序列的多核苷酸。

2.如权利要求1所述的具有启动子活性的多核苷酸的突变体，其特征在于，所述突变体在对应于SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列的第789至第799位存在突变；优选地，所述突变体的核苷酸序列如SEQ ID NO：3-5所示。

3.包含如权利要求1-2任一项所述启动子的表达盒；可选地，所述表达盒还含有目标基因，所述目标基因与所述具有启动子活性的多核苷酸可操作地连接。

4.包含如权利要求1-2任一项所述具有启动子活性的多核苷酸或权利要求4所述表达盒的重组载体。

5.含有权利要求1-2任一项所述具有启动子活性的多核苷酸、或权利要求3所述的表达盒、或权利要求4所述重组载体的重组微生物宿主细胞；优选地，所述重组微生物宿主细胞选自肠杆菌或棒杆菌，优选谷氨酸棒杆菌或大肠杆菌，包括但不限于谷氨酸棒杆菌ATCC13869、谷氨酸棒杆菌ATCC 13032、谷氨酸棒杆菌B253、谷氨酸棒杆菌ATCC 14067，以及由上述菌株制备的产生L-氨基酸的突变体或菌株。

6.一种增强目的基因表达的方法，所述方法包括将如权利要求1-2任一项所述具有启动子活性的多核苷酸与目的基因可操作地连接。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述目的基因是氨基酸合成相关的基因，如谷氨酸脱氢酶Gdh，柠檬酸合酶GltA、酮戊二酸脱氢酶OdhA、丙酮酸羧化酶PYC、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶PPC、天冬氨酸激酶LysC、苏氨酸操纵子ThrABC、天冬氨酸半醛脱氢酶Asd、天冬氨酸氨裂合酶AspB、高丝氨酸脱氢酶Hom、高丝氨酸O-乙酰基转移酶MetX、二氢吡啶二羧酸合成酶DapA、二氢吡啶甲酸还原酶DapB、内消旋-二氨基庚二酸脱氢酶Ddh、谷氨酸激酶ProB、谷氨酸-5-半醛脱氢酶ProA、吡咯-5-羧酸脱氢酶ProC、脯氨酸脱氢酶/吡咯-5-羧酸脱氢酶PutA的基因等。

8.一种制备蛋白的方法，所述方法包括利用权利要求3所述的表达盒、权利要求4所述的重组载体，或权利要求5所述的重组微生物宿主细胞表达所述蛋白的步骤；任选地，还包括分离或纯化所述蛋白的步骤。

9.一种生产目标化合物的方法，其中，所述方法包括利用权利要求3所述的表达盒，权利要求4所述的重组载体，或权利要求5所述的重组宿主细胞表达与目标化合物合成相关的蛋白或基因表达调控蛋白，在所述与目标化合物合成相关的蛋白或所述基因表达调控蛋白存在的环境下生产目标化合物的步骤；优选地，所述目标化合物为氨基酸；可选地，包括脯氨酸、赖氨酸、谷氨酸、羟脯氨酸、精氨酸、鸟氨酸；所述目标化合物合成相关的蛋白包括但不限于谷氨酸脱氢酶Gdh，柠檬酸合酶GltA、酮戊二酸脱氢酶OdhA、丙酮酸羧化酶PYC、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶PPC、天冬氨酸激酶LysC、苏氨酸操纵子ThrABC、天冬氨酸半醛脱氢酶Asd、天冬氨酸氨裂合酶AspB、高丝氨酸脱氢酶Hom、高丝氨酸O-乙酰基转移酶MetX、二氢吡啶二羧酸合成酶DapA、二氢吡啶甲酸还原酶DapB、内消旋二氨基庚二酸脱氢酶Ddh、谷氨酸激酶ProB、谷氨酸-5-半醛脱氢酶ProA、吡咯-5-羧酸脱氢酶ProC、脯氨酸脱氢酶/吡咯-5-羧酸脱氢酶PutA等。

10.如权利要求1-2任一项所述具有启动子活性的多核苷酸、权利要求3所述的表达盒，权利要求4所述的重组载体，权利要求5所述的重组微生物宿主细胞在增强基因的表达、制备蛋白、生产目标化合物中的用途。