[发明专利]检测活性可溶性尿激酶受体的方法和检测用试剂盒

权利要求书

1.检测生物样品中的活性可溶性尿激酶型纤溶酶原激活剂受体的方法，包括如下步骤：

1)使捕获试剂与待测样品在适合于所述捕获试剂捕获待测样品中活性suPAR的条件下接触，形成捕获试剂与活性suPAR的复合物；

2)使所形成的复合物与特异性结合被捕获的活性suPAR的试剂结合，并通过检测所述特异性结合被捕获的活性suPAR的试剂来检测被捕获的活性suPAR，

其中：

所述捕获试剂是含有ATF的融合蛋白；

所述特异性结合被捕获的活性suPAR的试剂是结合于活性suPAR外侧的单克隆抗体。

2.根据权利要求1的方法，所述ATF具有SEQ ID NO.2所示氨基酸序列。

3.根据权利要求1的方法，其中：

所述结合于活性suPAR外侧的单克隆抗体是用uPAR-D2D3(氨基酸88-283)免疫小鼠，经杂交瘤技术筛选而得到的单克隆抗suPAR抗体；

所述结合于活性suPAR外侧的单克隆抗体是抗体ATN-658；

随所述单克隆抗体还添加甘油磷酸钠，二者添加的质量比为1：50～100例如1：75；

所述特异性结合被捕获的活性suPAR的试剂还包括与所述单克隆抗体结合的二抗，该二抗例如是碱性磷酸酶标记的抗鼠IgG；

所述ATF的融合蛋白是ATF与另一种蛋白质或多肽或其片段的融合蛋白；所述另一种蛋白质或多肽或其片段可以是血清白蛋白，例如人血清白蛋白(HSA)、牛血清白蛋白(BSA)，也可以是卵清蛋白(OVA)；含有ATF的融合蛋白是ATF-HSA融合蛋白；和/或

所述ATF的融合蛋白被固定在固体基质上；所述固体基质包括但不限于多孔板(如96孔板)、蛋白质芯片底膜(例如硝酸纤维素膜、尼龙膜等)、磁珠等。

4.根据权利要求1的方法，其包括如下步骤：

(1)向多孔板的孔内加入经包被液稀释的ATF-HSA蛋白溶液进行包被(4℃过夜)，洗涤并干燥；(2)向孔中加入封闭液进行封闭，室温孵育，洗涤并干燥；(3)向一些孔中分别加入一系列浓度的活性suPAR标准品，向另一些孔中加入的样品稀释液作为空白对照，向其它孔中加入待检样品(例如用样品稀释液稀释10倍的稀释液)；室温孵育，洗涤并干燥；(4)向所有孔内加入经样品稀释液稀释的鼠抗人源suPAR的单克隆抗体例如为ATN-658抗体，室温孵育，洗涤并干燥；(5)向所有孔内加入碱性磷酸酶标记的抗鼠IgG(例如碱性磷酸酶标记二抗(Anti-mouse IgG,AP-linked Antibody))，室温孵育，洗涤并干燥；(6)向每孔内加入显色液，接着将多孔板置于酶标仪上于405nm读取吸光度；(7)依据不同浓度活性suPAR标准品的吸光度随时间变化的动力学过程(酶反应速度)与标准品浓度求得回归方程，用该回归方程计算样品中活性suPAR的浓度。