[发明专利]一种低酸性组分含量的重组抗EGFR单克隆抗体

权利要求书

1.一种重组抗EGFR单克隆抗体，其特征在于：所述重组抗EGFR单克隆抗体中，酸性组分的含量为6％以下。

2.根据权利要求1所述的重组抗EGFR单克隆抗体，其特征在于：所述重组抗EGFR单克隆抗体中，酸性组分的含量为5.3％-5.7％；

和/或，所述重组抗EGFR单克隆抗体中，DNA残留水平为0.013pg/mg以下；

和/或，所述重组抗EGFR单克隆抗体的纯度为99.6％以上。

3.根据权利要求1或2所述的重组抗EGFR单克隆抗体，其特征在于：所述重组抗EGFR单克隆抗体的制备方法包括以下步骤：

(1)将表达重组抗EGFR单克隆抗体的细胞发酵培养，收集发酵液，过滤或离心，收集清液；

(2)将步骤(1)所得滤液进行亲和层析，收集洗脱液；

(3)将步骤(2)所得洗脱液进行低pH孵育，过滤，收集滤液；

(4)将步骤(3)所得滤液进行阳离子交换层析，收集洗脱液；所述阳离子交换层析采用的洗脱液为由A相和B相组成的梯度洗脱液，其中B相的体积分数为5％-65％；A相为含10-40mM磷酸盐的溶液，pH值为5.5-6.2；B相为含10-40mM磷酸盐和0.05-0.2M氯化钠的溶液，pH值为5.5-6.2。

4.根据权利要求3所述的重组抗EGFR单克隆抗体，其特征在于：步骤(1)中，所述细胞为CHO细胞；和/或，所述过滤为深层过滤；

和/或，步骤(2)中，所述亲和层析中，填料为Protein A、MabSelect、Prosep、POROS或TOSOH，所述Protein A优选为AF-rProtein A，更优选为AF-rProtein A Hc-650F；

所述亲和层析包括以下步骤：

(2.1)淋洗：依次用淋洗液1和淋洗液2淋洗亲和层析柱，淋洗液1为含0.05-0.2M柠檬酸和0.25-1.0M氯化钠的溶液，pH为5.5-6.2；淋洗液2为0.02-0.10M醋酸钠溶液，pH为5.5-6.2；

优选地，淋洗液1为含0.1M柠檬酸和0.5M氯化钠的溶液，pH为6.0；淋洗液2为0.05M醋酸钠溶液，pH为6.0；

(2.2)洗脱：用洗脱液进行洗脱，洗脱液为含0.05-0.2M甘氨酸和0.01-0.04M氯化钠的溶液，pH为2.8-3.2；

优选地，洗脱液为含0.1M甘氨酸和0.02M氯化钠的溶液，pH为3.0±0.1；

(2.3)收集：收集洗脱液。

5.根据权利要求3所述的重组抗EGFR单克隆抗体，其特征在于：步骤(3)中，所述低pH孵育的温度为20-25℃，时间为1.5h以上，pH值为3.2-3.6；

和/或，步骤(4)中，所述阳离子交换层析包括以下步骤：

(4.1)前平衡：用平衡液冲洗阳离子交换层析柱；所述平衡液为含10-40mM磷酸盐的溶液，pH值为5.5-6.2；

(4.2)上样：将步骤(3)所得滤液的pH调节至5.5-6.2，上样；

(4.3)后平衡：用平衡液冲洗阳离子交换层析柱；

(4.4)淋洗：用淋洗液淋洗阳离子交换层析柱；淋洗液由A相和B相组成，其中B相的体积分数为4％-6％；

(4.5)洗脱：用洗脱液进行梯度洗脱；

(4.6)收集：收集洗脱液，在UV280值升至0.1AU时开始收集，在UV280值降至0.1AU时结束收集。