[发明专利]具有可差别切割的接头的标记的探针及其在解码DNA和RNA分子中的用途

权利要求书

1.用于通过下述检测RNA、DNA或蛋白质靶序列的方法

a）将具有通式（I）的探针文库杂交至RNA、DNA或蛋白质靶序列

P–(CL-D)_x（I）

其中P：具有至少10个核苷酸或氨基酸的探针

CL：可切割接头

D：荧光染料

X：1-5的整数

其中所述文库包含具有不同核苷酸或氨基酸序列的探针P和可用不同方式切割的不同组的可切割接头CL

b）去除未杂交的探针并通过第一图像经由荧光团D检测杂交的探针

c）通过不同的方式从杂交的探针顺序切割每组化学接头CL；去除如此切割的荧光团D并通过第二图像经由它们的荧光团D检测剩余的杂交的探针

d）通过比较第一和第二图像来检测去除的荧光团D

e）经由与去除的荧光团D有关的探针P的序列信息获得靶序列的部分序列信息

f）重复步骤c）直到所有组的化学接头CL都被切割为止。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于在步骤f）之后，探针P从RNA、DNA或蛋白质靶序列去杂交。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于重复步骤a）至f），直到获得RNA、DNA或蛋白质靶序列的序列信息为止。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于所述可切割接头CL可通过化学、光化学或酶促手段切割。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于所述可切割接头CL是选自多糖、蛋白质、肽、酯肽、聚酯、核酸及其衍生物的酶促可切割接头。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于所述多糖选自葡聚糖、支链淀粉、菊粉、直链淀粉、纤维素、半纤维素、木聚糖、葡甘露聚糖、果胶、壳聚糖和几丁质。

7.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于所述可切割接头CL选自二硫化物接头（-SS-，（a））、氧亚甲基二硫化物（-OCH₂SSCR₁R₂-，（b））、氧次甲基叠氮化物（-CR₁,R₂OCH(N₃)R₃,R₄)-，（c））、偶氮芳烃（-ArN=NAr-，（d））、硝基苄基衍生物 –（e）、烯丙基衍生物（f）、硫代氨基甲酸酯（g），其中R₁、R₂、R₃、R₄可以独立地为H、甲基、乙基、丙基、叔丁基、C5-C10烷基、烯、炔、羟基、卤、胺、酰胺、羧酸酯、聚乙二醇。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其特征在于所述文库包含具有至少两个不同组的可切割接头CL的探针，所述接头CL可用选自两种不同的光化学活化辐射、两种不同的酶、两种不同的化学剂、一种光化学活化辐射和一种酶，一种光化学活化辐射和一种化学剂、一种酶和一种化学剂的两种不同方式切割。