[发明专利]一种用于碱基编辑的复合物及其在治疗肝豆状核变性中的应用

权利要求书

1.一种复合物，其特征在于，包括：

(a)腺嘌呤碱基编辑器；

(b)向导RNA；

其中，所述腺嘌呤碱基编辑器为ABE8e NG，所述向导RNA的原位间隔序列包括SEQ IDNO:8-14所示的序列中的一种或多种，所述向导RNA的原位间隔序列的PAM为AGG或GGG。

2.如权利要求1所述的复合物，其特征在于，所述向导RNA的原位间隔序列为SEQ IDNO:10所示的序列。

3.如权利要求1或2所述的复合物在制备治疗肝豆状核变性的药物中的应用，所述肝豆状核变性由P992L突变引起。

4.一种用于肝豆状核变性治疗的试剂盒，其包括：

(a)编码腺嘌呤碱基编辑器的核酸序列，所述腺嘌呤碱基编辑器为ABE8e NG；

(b)编码向导RNA的表达构建体，所述编码向导RNA的表达构建体包括SEQID NO:1-7所示的序列中的一种或多种，所述向导RNA的原位间隔序列的PAM为AGG或GGG；

其中，所述肝豆状核变性由P992L突变引起。

5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述编码向导RNA的表达构建体包括SEQID NO:3所示的序列。

6.一种体外编辑与肝豆状核变性有关的P992L突变的方法，所述P992L突变为ATP7B基因的c.2975CT突变，所述方法包括：

(1)使含所述P992L突变的多核苷酸与腺嘌呤碱基编辑器接触，其中所述腺嘌呤碱基编辑器与向导RNA复合；

(2)所述腺嘌呤碱基编辑器在所述向导RNA的引导下，靶向含所述P992L突变的多核苷酸；

(3)所述腺嘌呤碱基编辑器中的腺嘌呤脱氨酶将含所述P992L突变的多核苷酸中的腺嘌呤脱氨以生成次黄嘌呤；

(4)所述次黄嘌呤经依赖DNA的修复和复制转变为鸟嘌呤，使得含所述P992L突变的多核苷酸中所述P992L突变处实现A·T至G·C改变，进而将ATP7B蛋白第992个氨基酸L回复为P；

其中，所述腺嘌呤碱基编辑器为ABE8e NG，所述向导RNA的原位间隔序列包括SEQ IDNO:8-14所示的序列中的一种或多种，所述向导RNA的原位间隔序列的PAM为AGG或GGG。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述向导RNA的原位间隔序列为SEQ ID NO:10所示的序列。

8.一种细胞，其包括如权利要求1或2所述的复合物，所述细胞为人类细胞或哺乳动物细胞，所述细胞为离体的或体外的。