[发明专利]一种用于碱基编辑的复合物及其在治疗肝豆状核变性中的应用

说明书

本发明涉及基因编辑领域，具体涉及一种用于碱基编辑的复合物及其在治疗肝豆状核变性中的应用。本发明提供了一种复合物，其特征在于，包括：(a)腺嘌呤碱基编辑器；(b)向导RNA；其中，所述腺嘌呤碱基编辑器为ABE8eNG。本发明提供的复合物能够高效地纠正致病基因ATP7B的P992L突变位点，有望应用至肝豆状核变性的治疗。

技术领域

本发明涉及基因编辑领域，具体涉及一种用于碱基编辑的复合物及其在治疗肝豆状核变性中的应用。

背景技术

肝豆状核变性(hepatolenticular degeneration，HLD)又称Wlison病(WD)，是一种常染色体隐性遗传的铜代谢障碍疾病。WD是以铜代谢障碍引起的肝硬化、基底核损害为主的肝脑变性疾病。WD的临床上表现为进行性加重的椎体外系症状、肝硬化、精神症状、肾功能损害及角膜色素环K-F环。据统计，世界范围内的WD患病率为1/10000到1/30000之间且杂合子频率约为1/100-1/200，而WD在中国的发病率高于其他西方国家。

WD的铜代谢障碍的具体表现有：血清总铜量和铜蓝蛋白减少而疏松结合部分的铜量增多，肝脏排泄铜到胆汁的量减少，尿铜排泄量增加，许多器官和组织中有过量的铜沉积(尤以肝、脑、角膜、肾等处为明显)。过度沉积的铜可损害这些器官的组织结构和功能而致病。据发现，WD的发病机制是编码铜依赖性的P型ATP酶的ATP7B基因异常，影响了ATP酶的正常结构和功能，进而导致体内铜的蓄积而影响肝脏、大脑等器官组织及神经系统。肝豆状核变性为常染色体隐性遗传性疾病。致病基因ATP7B的变异位点繁多，且基因突变位点具有种族特异性。针对中国人群的大规模研究表明，在鉴定的569名汉族WD患者的p.ATP7B中，p.R778L、p.P992L和p.T935M是亚洲人占比前三的常见突变。根据对单碱基编辑突变造成hATP7B疾病的突变频率分析，R778L和P992L这两种突变在亚洲人中占比最高，分别占比30％及15％，且大多数病人为杂合突变。

发明内容

第一方面，本发明提供了一种复合物，其特征在于，包括：

(a)腺嘌呤碱基编辑器；

(b)向导RNA；

其中，所述腺嘌呤碱基编辑器为ABE8e NG，所述向导RNA的原位间隔序列包括SEQID NO:8-14所示的序列中的一种或多种。

在一个实施方案中，所述向导RNA的原位间隔序列为SEQ ID NO:10所示的序列。

第二方面，本发明还提供了上述复合物在制备治疗肝豆状核变性的药物中的应用。

在一个实施方案中，所述肝豆状核变性由P992L突变引起。

第三方面，本发明还提供了一种用于肝豆状核变性治疗的试剂盒，其包括：(a)编码碱基编辑器的核酸序列，所述碱基编辑器为ABE8e NG；

(b)编码向导RNA的表达构建体，所述编码向导RNA的表达构建体包括SEQ ID NO:1-7所示的序列中的一种或多种。

在一个实施方案中，所述编码向导RNA的表达构建体包括SEQ ID NO:3所示的序列。

第四方面，本发明还提供了一种体外编辑与肝豆状核变性有关的P992L突变的方法，所述P992L突变为ATP7B基因的c.2975CT突变，所述方法包括：

(1)使含所述P992L突变的多核苷酸与腺嘌呤碱基编辑器接触，其中所述腺嘌呤碱基编辑器与向导RNA复合；

(2)所述腺嘌呤碱基编辑器在所述向导RNA的引导下，靶向所述含所述P992L突变的多核苷酸；

(3)所述腺嘌呤碱基编辑器中的腺嘌呤脱氨酶将所述含所述P992L突变的多核苷酸中的腺嘌呤脱氨以生成次黄嘌呤；