[发明专利]用于变体检测的方法

权利要求书

1.一种用于rhPCR的封闭-可切割的引物，所述引物包含：

5’-A-B-C-D-E-3’

其中，

A为任选的，并且为不与靶标互补的尾延伸；

B为与靶标互补的序列结构域；

C为辨别结构域；

D为可切割的结构域，当与所述靶标杂交时所述可切割的结构域可被RNA酶H2切割；并且

E为封闭结构域，所述封闭结构域防止所述引物的延伸。

2.权利要求1的引物，其中，D包含1-3个RNA碱基。

3.权利要求1的引物，其中，D包含1个RNA碱基。

4.权利要求1的引物，其中，所述可切割结构域包含以下部分中的一个或多个：DNA残基、脱碱基残基、修饰的核苷或修饰的磷酸核苷酸间连接。

5.权利要求4的引物，其中，侧接所述切割位点的序列含有抗核酸酶切割的一个或多个核苷酸间连接。

6.权利要求5的引物，其中，所述核酸酶抗性连接为硫代磷酸酯。

7.权利要求2的引物，其中，所述RNA残基的至少一个的3′氧原子被氨基、巯基或亚甲基取代。

8.权利要求1的引物，其中，所述封闭基团与所述引物的3′-末端核苷酸附接。

9.权利要求1的引物，其中，A包含与通用正向引物相同的区域以及任选的探针结合结构域。

10.一种从等位基因扩增图可视化多个不同荧光信号的方法，所述方法包括：

(a)使用来自单个反应孔中的多种荧光染料信号的三种荧光信号，从来自Dye₁和Dye₂的荧光信号减去最低荧光Dye₃；

(b)用以下等式计算数据与原点之间的距离以及与多个轴之一的角度：

和

(c)在有三个轴的圆形图上标绘所得到的距离，所述三个轴是每个染料或等位基因对应一个轴。