[发明专利]与KPC酶结合的抗体或其抗原结合片段及其应用

说明书

本发明提供了一种与KPC酶结合的抗体或其抗原结合片段及其应用，涉及单克隆抗体的技术领域。该与KPC酶结合的抗体或其抗原结合片段具有分别如Seq_1～3所示，或分别如Seq_11～13所示的轻链CDR；和/或，分别如Seq_4～6所示，或分别如Seq_14～16所示的重链CDR。该与KPC酶结合的抗体或其抗原结合片段具有特异性好、亲和力高等特点，缓解了现有技术中与KPC酶结合的单克隆抗体效果不佳的技术问题。

技术领域

本发明涉及单克隆抗体技术领域，尤其是涉及一种与KPC酶结合的抗体或其抗原结合片段及其应用。

背景技术

目前产KPC酶的细菌已经在全球范围内广泛传播，造成了对碳青霉烯类、青霉素类、头孢菌素类和氨曲南在内的几乎所有β-内酰胺类抗菌药物耐药，并且产KPC酶的菌株种类正在增加，随时可能引起医院感染的爆发和流行，因此产KPC酶细菌的感染将是我们面临的严重问题，应引起微生物学家和临床医师的高度重视。自KPC-1在美国卡罗利亚州发现以来，不同国家地区陆续对产KPC酶细菌进行了报道，总体呈现出全球播散的趋势。KPC存在多个突变体，流行病学表明KPC-2与KPC-3为存在的主要亚型，几乎存在于已报道的所有国家。

KPC-1酶耐药表型表现出高度亚胺培南和美罗培南耐药性，当存在克拉维酸时，针对亚胺培南和美罗培南的β-内酰胺酶活性被抑制；对头孢菌素类抗菌药物和氨曲南也耐药。KPC-1基因由大约50kb的非结合性质粒携带。KPC-1酶是一种新的属于A类Bush2f组的可水解碳青霉烯的β-内酰胺酶，肺炎克雷伯菌1534的碳青霉烯耐药性主要由KPC-1酶介导，孔蛋白表达的改变可能也起了某种作用。KPC-2酶与KPC-1酶有一个氨基酸的改变，S174G，分类也属于A类Bush2f组。KPC-2酶从肠炎沙门菌和肺炎克雷伯菌而来，DNA序列表明，编码KPC-2的质粒与沙门菌中的质粒有98％的同源性，因此，此质粒可在肠杆菌中结合而传播KPC-2。KPC-2酶能单独引起碳青霉烯类耐药，不依赖于膜孔蛋白的丢失，基因由可转移的70kb质粒编码，位于质粒的转座子上，具有高传播可能。KPC-3酶由75kb的质粒编码，可以结合转移。KPC3酶是由882bp的碱基编码的293个氨基酸残基的肽链，和KPC-1酶相比有2个碱基的改变，可通过电穿孔转移和结合。所有的KPC结合子对碳青霉烯类的药敏比原菌株要敏感。KPC-1、KPC-3酶均需要结合膜孔蛋白ompK35，其表达缺失引起对碳青霉烯类的耐药。

根据CLSIM100S30文件，临床上对产KPC酶细菌的检测主要是常规的药敏试验，如肉汤稀释法、纸片扩散法以及浓度梯度法，这些方法对产KPC酶细菌的检测较为困难，原因如下：产KPC酶细菌仅对碳青霉烯类抗菌药物敏感性降低，还达不到完全耐药的水平；产KPC酶细菌应用ESBLs确证试验检测为阳性，容易鉴定为ESBLs菌株；产KPC酶细菌接种效应会影响亚胺培南的MIC，造成错检。目前，大多使用改良的Hodge实验对碳青霉烯酶进行检测，却无法进一步确认其是否为KPC酶。除CarbaNP法外，其他几种方法基本都是基于培养的，耗时长达3-7天，且操作复杂，需要有专业背景的技术人员，对于难培养或生长缓慢的细菌无能为力，难以满足临床需要。CarbaNP方法需要特殊试剂，其中一些需自制，有效期短，灵敏度低。现在普遍认为，产KPC酶细菌的检测金标准是分子生物学方法，但PCR检测需要配备专门的实验仪器，工作人员需要获得检测资质，单个检测成本较高，并未在临床实验室得到常规开展。产KPC酶细菌的准确检测对临床实验室检查仍然是一个巨大的挑战。

单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对特定抗原表位的抗体，通常采用杂交瘤细胞制备，基于细胞融合技术，将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤，培养成细胞群后，可制备针对一种抗原表位的特异性抗体，即单克隆抗体。