[发明专利]一种抗天然辣椒素、二氢辣椒素和合成辣椒素通用单克隆抗体HOPE1及其应用

说明书

本发明公开了一种抗天然辣椒素、二氢辣椒素和合成辣椒素通用单克隆抗体HOPE1及其应用，其重链可变区序列如SEQ ID NO.1所示，轻链可变区序列如SEQ ID NO.2所示。单克隆抗体HOPE1对天然辣椒素、合成辣椒素、二氢辣椒素及天然辣椒素、合成辣椒素、二氢辣椒素混合物的半抑制浓度分别达到0.32ng/mL、0.07ng/mL、0.21ng/mL、103.8pg/mL，对辣椒素类物质具有强的亲和力；通过本发明提供的单克隆抗体HOPE1建立的用于检测辣椒素类物质含量的ic‑ELISA免疫检测方法和时间分辨荧光免疫层析法，具有灵敏度高、检测限低的优势。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种抗天然辣椒素、二氢辣椒素和合成辣椒素通用单克隆抗体HOPE1及其应用。

背景技术

辣椒素类物质是一类香兰素结构为骨架，带有长侧链基团的小分子化合物，其中三种代表性辣椒素的是天然辣椒素(CPC)、合成辣椒素(N-V)和二氢辣椒素(DCPC)，它们的结构分别为：a.天然辣椒素b.合成辣椒素c.二氢辣椒素

辣椒素类物质已经得到了十分广泛的应用，比如：可以用作调味剂、制备药物、用作农药、作为防污涂料、还可用于电缆材料。建立高灵敏度的辣椒素类物质检测方法对于辣椒素的应用具有重要的意义。天然辣椒素和二氢辣椒素占辣椒素使用总量的90％，合成辣椒素具有与天然辣椒素类似的结构部和功能，由于合成辣椒素相对于天然辣椒素，其制作成本更低，很有可能在日后替代天然辣椒素和二氢辣椒素，被广泛应用，所以天然辣椒素、二氢辣椒素、合成辣椒素能作为辣椒素类物质的代表，建立适用于天然辣椒素、二氢辣椒素和合成辣椒素的检测方法即可满足现有对于辣椒素类物质的检测需求。

现有的辣椒素类物质分析检测方法包括感官鉴定法、凯氏定氮法、化学检测法(包括呋喃甲醛法、三氯化铁法和氧氯钒法)﹑分光光度法、光谱测定法、薄层色谱法、高效液相色谱法、色谱-质谱联用和免疫分析方法等。其中免疫分析方法具有特异性强、灵敏度高、分析容量大、方便快捷、成本低廉、适于现场批量检测等优点，被广泛应用于辣椒素类物质的检测。抗体是免疫分析方法的核心试剂，制备灵敏度高、通用性好的辣椒素类物质抗体是建立良好的辣椒素类物质免疫分析方法的前提。由于辣椒素类物质属于一类小分子物质，它们能被抗体特异性识别，但其本身却不能引起机体的免疫应答反应，因此辣椒素的单克隆抗体制备必须采用人工合成抗原进行免疫。

杨青青(2016)在《食用植物油外源污染物辣椒素及黄曲霉毒素免疫检测技术研究》中制备了一种辣椒素类物质的半抗原HaptenC，随后将其与载体蛋白偶联，制成人工完全抗原，并进行小鼠免疫，通过单克隆首次制备了针对辣椒素类物质的单克隆抗体YQQD8，并基于该抗体建立了一系列的免疫分析方法(ELISA、荧光偏振及毛细管电泳免疫检测法、胶体金侧流免疫层析快速检测法、时间分辨荧光免疫层析法、免疫亲和柱-HPLC-MS/MS检测法)。但该抗体对天然辣椒素、二氢辣椒素、合成辣椒素的IC₅₀值分别只有：8.5ng/mL、5.0ng/mL、13.5ng/mL，通过抗体和辣椒素类物质的3D模型对接发现，单克隆抗体YQQD8只有1个氨基酸残基参与与辣椒素类物质的疏水相互作用，亲和力不强，免疫分析方法中抗体与抗原的亲和力对分析方法的灵敏度有极大的影响，因此，寻找具有更高亲和力的辣椒素类物质抗体具有相当的必要性。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，旨在提供一种抗天然辣椒素、二氢辣椒素和合成辣椒素通用单克隆抗体HOPE1及其应用，建立灵敏度更高的辣椒素类物质分析方法。

本发明的首要目的在于提供一种抗天然辣椒素、二氢辣椒素和合成辣椒素中的一种或多种的单克隆抗体HOPE1。

本发明的另一目的在于提供单克隆抗体HOPE1在天然辣椒素、二氢辣椒素、合成辣椒素中的一种或多种的含量检测和/或制备天然辣椒素、二氢辣椒素、合成辣椒素中的一种或多种的含量检测的试剂盒中的应用。

本发明的又一目的在于提供一种天然辣椒素、二氢辣椒素、合成辣椒素中的一种或多种的含量检测的试剂盒。