[发明专利]一种多花黄精新品种再生与体外成苗的方法

权利要求书

1.一种多花黄精新品种再生与体外成苗的方法，其特征在于：所述多花黄精新品种为祁源黄精，所述方法包括以下步骤：以所述祁源黄精块茎萌发幼苗的幼嫩叶片为外植体，经表面消毒后，剪切成适宜大小的切块后，经不定芽诱导、不定芽增殖和伸长、瓶外不定根诱导处理、定植及成苗管理步骤最终获得祁源黄精完整再生植株；

所述幼嫩叶片的叶龄为13-17d；

所述不定芽诱导采用的培养基为含有0.5-2.0mg/L TDZ、0.5-2.5mg/LAgNO₃、3.0％蔗糖和琼脂的DKW培养基；

所述不定芽增殖和伸长采用的培养基为含有0.05-1.0mg/L TDZ、0.05-0.25mg/L IAA、0.5-2.5mg/L GA₃、3.0％蔗糖和琼脂的DKW培养基；

所述瓶外不定根诱导处理采用的培养基为含有500-1000mg/L K-IBA、100-500mM褪黑素和200-500mg/L NAA的生根促进液。

2.根据权利要求1所述的多花黄精新品种再生与体外成苗的方法，其特征在于：所述表面消毒包括以下步骤：将外植体放置于容器中密闭后，于自来水下冲洗、置于无菌操作台中，用无菌水冲洗，然后用无水乙醇消毒，再用无菌水冲洗，然后用0.1％HgCl₂溶液消毒2-3min，再用无菌水冲洗遍，最后用无菌滤纸吸干种子表面水分后备用。

3.根据权利要求1所述的多花黄精新品种再生与体外成苗的方法，其特征在于：所述剪切成适宜大小的切块是指将叶片去除叶尖后剪切成0.25-1.0cm²大小，备用。

4.根据权利要求1所述的多花黄精新品种再生与体外成苗的方法，其特征在于：所述不定芽增殖和伸长指将光照培养4周后的伸长的祁源黄精不定芽接种于不定芽增殖和伸长采用的培养基。

5.根据权利要求1所述的多花黄精新品种再生与体外成苗的方法，其特征在于：所述瓶外不定根诱导处理是指将光照培养4周后的伸长的黄精不定芽从不定芽丛上分离下来，经流水冲洗后，吸干表面水分后，将伸长芽的形态学下端浸于瓶外不定根诱导处理采用的培养基中进行不定根诱导处理，所述诱导处理的时间为30-120s。

6.根据权利要求1所述的多花黄精新品种再生与体外成苗的方法，其特征在于：所述定植是将经不定根诱导处理后的祁源黄精组培伸长芽的形态学下端定植于装有营养基质的营养基质盘中进行不定根的诱导；所述的营养基质包括营养土、珍珠岩和蛭石，其中营养土、珍珠岩与蛭石的的质量比为2:1:1。

7.根据权利要求1所述的多花黄精新品种再生与体外成苗的方法，其特征在于：所述成苗管理是将定植后的祁源黄精组培伸长芽喷施一次营养液，盖上盖子，置于温度为20-23℃、相对湿度为85-90％的温室中进行成苗培养，每隔5-7d浇1次水，1个月后去除塑料盖。

8.根据权利要求7所述的多花黄精新品种再生与体外成苗的方法，其特征在于：所述营养液的成分为用双蒸水配制的30％-50％的霍格兰氏营养液。

9.根据权利要求1所述的多花黄精新品种再生与体外成苗的方法，其特征在于：所述不定芽诱导采用的培养基为含有0.5mg/L TDZ和2.0mg/LAgNO₃的DKW培养基，所述不定芽增殖和伸长采用的培养基为含有0.2mg/L TDZ、0.05mg/L IAA和1.0mg/L GA₃的DKW培养基。