[发明专利]一种人源化抗人γδTCR单克隆抗体及其编码基因、制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种人源化抗人γδTCR单克隆抗体及其编码基因、制备方法和应用，属于生物技术领域中的人源化单克隆抗体制备技术领域。本发明提供的人源化抗人γδTCR单克隆抗体的重链可变区包含SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列，轻链可变区包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列，该人源化抗人γδTCR单克隆抗体能够在体外刺激扩增外周血γδT细胞，获得的γδT细胞能够分泌多种细胞因子，且能够有效杀伤多种肿瘤细胞。

技术领域

本发明属于生物技术领域中的人源化单克隆抗体及其制备技术领域，具体涉及一种人源化抗人γδTCR单克隆抗体及其编码基因、制备方法和应用。

背景技术

T淋巴细胞根据其细胞膜表面的T细胞受体(T cell receptor，TCR)的组成不同，可分为两个亚群：αβT细胞亚群和γδT细胞亚群。前者的TCR是由α和β两条糖蛋白链组成，占T细胞总数的绝大部分；后者的TCR则是由γ和δ链组成，只占外周血T细胞的极少部分(5％)，但其在表皮及粘膜等上皮组织中含量丰富。

虽然γδT细胞的发现晚于αβT细胞，但是在生物进化过程中，γδT细胞的发生出现在生物的免疫系统进化出适应性免疫的早期，且要早于αβT细胞。由于它在进化中的特殊地位，γδT细胞虽然是适应性免疫的一部分，但仍保留了固有免疫的功能与特性。由于这种“双重”特性，γδT细胞被称为“沟通固有免疫和适应性免疫的桥梁”。γδT细胞具有多种生物学功能：1)可以分泌细胞因子介导炎症反应；2)促进B淋巴细胞分泌抗体及诱导抗体的类别转换；3)识别肿瘤抗原具有MHC非限制性且不需特异的抗原呈递，通过细胞毒活性作用直接裂解靶细胞；4)发挥免疫调节作用。

近年来，肿瘤过继免疫治疗在血液系统肿瘤中取得突破性进展，而在实体瘤治疗中由于肿瘤微环境内的免疫抑制作用受到极大的限制。研究发现γδT细胞能够有效渗入实体肿瘤中发挥抗肿瘤作用。抗体固相化体外扩增是获得γδT细胞的一个重要手段，然而目前在抗体固相化体外扩增方法中刺激γδT细胞增殖的γδTCR单克隆抗体多为鼠源性抗体，而鼠源性的单克隆抗体应用于人体治疗时存在诸多问题：一是不能有效地激活人体中补体和Fc受体相关的效应系统；二是被人体免疫系统所识别，产生人抗鼠抗体；三是在人体循环系统中被很快清除掉。因此，鼠源性抗γδTCR单克隆抗体在临床治疗中受到很多限制。现有技术中还没有关于人源化抗人γδTCR单克隆抗体的报道。

发明内容

针对现有技术中存在的问题的一个或多个，本发明一个方面提供一种人源化抗人γδTCR单克隆抗体，其重链可变区包含SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列或由其组成，轻链可变区包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列或由其组成。

在一些实施方式中，所述人源化抗人γδTCR单克隆抗体的重链恒定区包含SEQ IDNO:9所示的氨基酸序列或由其组成，轻链恒定区包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列或由其组成。

在一些实施方式中，所述人源化抗人γδTCR单克隆抗体的重链包含SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列或由其组成，轻链包含SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列或由其组成。

本发明另一方面提供一种编码所述人源化抗人γδTCR单克隆抗体的基因；优选地，其中编码所述人源化抗人γδTCR单克隆抗体的重链的基因包含如SEQ ID NO:12或SEQID NO:16所示的核苷酸序列或由其组成，编码所述人源化抗人γδTCR单克隆抗体的轻链的基因包含如SEQ ID NO:14所示的核苷酸序列或由其组成。

本发明另一方面还提供一种含有编码所述人源化抗人γδTCR单克隆抗体的基因的表达载体、转基因细胞系和宿主菌。

本发明再一方面提供一种制备所述人源化抗人γδTCR单克隆抗体的方法，其包括以下步骤：