[发明专利]一种萱草的遗传转化方法及其应用

权利要求书

1.一种萱草的遗传转化方法，其特征在于，包括如下步骤：

使用农杆菌侵染液侵染萱草转化受体，所述农杆菌中包括目的基因和ANS的编码基因，所述农杆菌能够将目的基因和ANS的编码基因插入到萱草转化受体中并使所述目的基因和ANS的编码基因共表达。

2.根据权利要求1所述的遗传转化方法，其特征在于，所述ANS的编码基因来自三色堇、拟南芥、番木瓜、金钱橘、甜橙或苹果中；优选的，所述ANS的编码基因来自三色堇中；更优选的，所述ANS的编码基因包括SEQ ID No.1所示序列和/或与SEQ ID No.1的序列具有至少90％以上序列同一性的序列。

3.根据权利要求1所述的遗传转化方法，其特征在于，所述农杆菌为根癌农杆菌或发根农杆菌；优选的，所述农杆菌为根癌农杆菌；更优选的，所述根癌农杆菌选自EHA105、EHA101、LBA4404、GV3101、AGL1中的一种或多种；更优选的，所述根癌农杆菌为LBA4404。

4.根据权利要求3所述的遗传转化方法，其特征在于，所述农杆菌中含有表达载体；优选的，所述表达载体选自PBI121、pCAMBIA1300、pCAMBIA1301、pCAMBIA3300中的一种或多种；更优选的，所述表达载体为PBI121；

优选的，所述目的基因和ANS的编码基因位于表达载体上。

5.根据权利要求1所述的遗传转化方法，其特征在于，所述农杆菌侵染液OD₆₀₀的值为0.5-1.0，侵染时间为10-20min；优选的，所述农杆菌侵染液OD₆₀₀的值为0.5，侵染时间为15min；

优选的，所述农杆菌侵染液中还包括乙酰丁香酮，所述乙酰丁香酮的浓度为100-200μmol/L；更优选的，所述乙酰丁香酮的浓度为150μmol/L。

6.根据权利要求1所述的遗传转化方法，其特征在于，所述遗传转化方法还包括将完成侵染的萱草转化受体进行暗培养的步骤；优选的，所述暗培养条件包括：培养温度为22℃-30℃，暗培养时间为1-2d；更优选的，所述暗培养条件包括：培养温度为24℃-28℃，暗培养时间为2d。

7.根据权利要求1所述的遗传转化方法，其特征在于，所述萱草转化受体包括萱草根、茎、叶、花和/或愈伤组织；优选的，愈伤组织。

8.根据权利要求7所述的遗传转化方法，其特征在于，所述愈伤组织完成侵染后在筛选培养基中进行筛选培养，所述筛选培养基包括抗生素；优选的，所述抗生素包括卡那霉素、羧苄西林、噻孢霉素中的一种或几种；优选的，所述抗生素包括卡那霉素和噻孢霉素；更优选的，所述抗生素包括50-200mg/L卡那霉素和100-200mg/L噻孢霉素；更优选的，所述抗生素包括50mg/L卡那霉素和200mg/L噻孢霉素；

更优选的，所述筛选培养基中抗生素浓度随培养过程逐渐降低至0mg/l。

9.一种利用农杆菌进行萱草遗传转化的产品，其特征在于，所述产品中包括：利用如权利要求1所述的遗传转化方法能够将目的基因和ANS的编码基因插入到萱草转化受体中并使所述目的基因和ANS的编码基因共表达的试剂，所述试剂包括农杆菌，所述农杆菌中包括目的基因和ANS的编码基因。

10.一种如权利要求1-8任一所述的遗传转化方法在制备萱草中的应用。