[发明专利]酰化矮牵牛素-3-O-芸香糖苷(反-对香豆酰)-5-O-葡萄糖苷制备方法

说明书

本发明提供酰化矮牵牛素‑3‑O‑芸香糖苷(反‑对香豆酰)‑5‑O‑葡萄糖苷制备方法，涉及黑枸杞酰化花色苷提取技术领域。该酰化矮牵牛素‑3‑O‑芸香糖苷(反‑对香豆酰)‑5‑O‑葡萄糖苷制备方法，包括以下制备步骤：步骤一、黑枸杞花色苷粗提物的萃取，步骤二、柱色谱的制备，步骤三、柱色谱纯化。本发明从1kg的冻干黑枸杞果中获得至少275mg的矮牵牛素‑3‑0‑芸香糖苷(反‑对香豆酰)‑5‑O‑葡萄糖苷(含量以飞燕草素‑3‑O‑芸香苷当量表示),纯度均可达到不低于97.07％，另外具有操作简单,处理量大,重复性好的特点。

技术领域

本发明涉及黑枸杞酰化花色苷提取技术领域，具体为酰化矮牵牛素-3-O-芸香糖苷(反-对香豆酰)-5-O-葡萄糖苷制备方法。

背景技术

花色苷是一类最常见并且分布最广的类黄酮化合物,是许多植物组织中最主要的水溶性色素，但其工业用途受限由于其化学结构的不稳定性。然而，花青素糖基部分的酰化改变了花色苷的化学性质并增强它的稳定性。一些天然酰化花色苷可用作功能食品的天然着色剂和生物活性成分。

目前，对于酰化花色苷制备大都采用大孔树脂纯化、制备色谱技术进行制备等技术。对于酰化花色苷的分离多采用中高压制备色谱，对仪器设备要求高，成本大。

发明内容

(一)解决的技术问题

针对现有技术的不足，本发明提供了酰化矮牵牛素-3-O-芸香糖苷(反-对香豆酰)-5-O-葡萄糖苷制备方法，解决了酰化花色苷分离对设备的要求高，分离成本大的问题。

(二)技术方案

为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：酰化矮牵牛素-3-O-芸香糖苷(反-对香豆酰)-5-O-葡萄糖苷制备方法，包括以下制备步骤：

步骤一：黑枸杞花色苷粗提物的萃取

4)取冻干黑枸杞加入70％乙醇水溶液并使用高速分散机中进行高速匀浆，之后将上述得到的产物定容到上述70％乙醇水溶液的50倍体积，得到产物A；

5)将产物A通过超声波处理后进行离心分离，取离心分离的上清液记为产物B；

6)将产物B在35℃下旋转蒸发去除乙醇和部分水，之后使用超纯水定容到上述定容体积的1/50，在加入石油醚脱脂后使用分液漏斗分离水相，之后将水相采用RC滤膜过滤得到花色苷粗提物；

步骤二：柱色谱的制备

将Sephadex LH-20加入超纯水轻柔搅拌过夜得到Sephadex LH-20胶体填入色谱柱内；

步骤三：柱色谱纯化

将步骤一中得到的花色苷粗提物通过Sephadex LH-20胶体色谱柱进行层析分离，之后进行洗脱。

优选的，所述高速分散机为Ultraturrax T25，工作转速为7000rpm。

优选的，所述超声波处理的时间为30min，离心分离的时间为10min。

优选的，所述RC滤膜的孔径为0.20μm。

优选的，所述步骤三在洗脱时依次采用超纯水、超纯水、10％乙醇水溶液、20％乙醇水溶液、20％乙醇水溶液、70％丙酮水溶进行洗脱。

优选的，所述步骤三在洗脱时依次采用超纯水、10％乙醇水溶液、20％乙醇水溶液、70％丙酮水溶液进行洗脱。

优选的，所述步骤三完成之后依次通过超纯水、20％乙醇水溶液、超纯水冲洗进行冲洗。

(三)有益效果

本发明提供了酰化矮牵牛素-3-O-芸香糖苷(反-对香豆酰)-5-O-葡萄糖苷制备方法。具备以下有益效果：