[发明专利]一种基于二代测序和蛋白质组学的纳米抗体生产及其应用方法在审
| 申请号： | 202211217124.6 | 申请日： | 2022-09-30 |
| 公开（公告）号： | CN115636879A | 公开（公告）日： | 2023-01-24 |
| 发明（设计）人： | 高海东;方雷;武小龙 | 申请（专利权）人： | 南京集思慧远生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C07K16/06 | 分类号： | C07K16/06;C07K1/22;C12N15/13;C12N15/85 |
| 代理公司： | 北京中济纬天专利代理有限公司 11429 | 代理人： | 陈友 |
| 地址： | 210046 江苏省南京市栖霞*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 二代 蛋白质 纳米 抗体 生产 及其 应用 方法 | ||
1.一种基于二代测序和蛋白质组学的纳米抗体生产方法，包含以下步骤：
1)抗原制备和免疫动物；
2)抗体的亲和纯化；
3)免疫后骆驼B细胞总mRNA的提取以及纳米抗体参考蛋白库的制备；
4)高亲和力纳米抗体的酶切以及蛋白质谱检测；
5)纳米抗体参考蛋白库的搜库和高置信度纳米抗体cDNA的确定；
6)高亲和力纳米抗体的基因工程表达。
2.如权利要求1所述的基于二代测序和蛋白质组学的纳米抗体生产方法，其特征在于，步骤3)中的动物为骆驼。
3.如权利要求1所述的基于二代测序和蛋白质组学的纳米抗体生产方法，其特征在于，步骤3)中使用NGS测序制备纳米抗体参考蛋白库。
4.如权利要求1所述的基于二代测序和蛋白质组学的纳米抗体生产方法，其特征在于，步骤4)中使用多酶切的方法进行高亲和力纳米抗体的酶切。
5.如权利要求1所述的基于二代测序和蛋白质组学的纳米抗体生产方法，其特征在于，步骤4)中使用LC-MS/MS进行蛋白质谱的检测。
6.如权利要求1所述的基于二代测序和蛋白质组学的纳米抗体生产方法，其特征在于，步骤5)中使用使用ProteinPlot软件进行纳米抗体参考蛋白库的搜库。
7.如权利要求1所述的基于二代测序和蛋白质组学的纳米抗体生产方法，其特征在于，步骤5)中利用NCBI提供的BLAST+(2.90)软件对搜库得到的纳米抗体序列与保守的纳米抗体框架序列进行比对，将比对成功的抗体序列利用IMGT提供的V-QUEST软件重新映射(Remap)到保守的纳米抗体框架序列中，根据成功映射到了的纳米抗体序列返回Unigene库中调取纳米抗体的cDNA序列。
8.如权利要求1所述的基于二代测序和蛋白质组学的纳米抗体生产方法，其特征在于，还包括步骤7)高亲和力纳米抗体的结合活性检测。
9.一种如权利要求1所述的基于二代测序和蛋白质组学的纳米抗体生产方法在抗体制备中应用。
10.一种如权利要求2-8任一项所述的基于二代测序和蛋白质组学的纳米抗体生产方法在抗体制备中应用。
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