[发明专利]白花前胡不定芽的繁殖方法

说明书

本发明涉及一种白花前胡不定芽的繁殖方法，依次包括以下步骤：外植体灭菌，得茎尖外植体；将茎尖外植体接种到扩繁培养基中培养，直至在外植体上诱导出长度≥0.5cm且个数≥5个的不定芽才结束培养；将不定芽分割成单芽；将单芽转接到生根培养基中培养，直至获得根数≥5根且株高≥3.0cm的生根后白花前胡无菌组培苗；将生根后白花前胡无菌组培苗放入水培瓶内进行水培养。本发明的方法外植体灭菌效果好、成活率高，不定芽诱导率高、生长状态好，组培苗生根率高，移栽成活率高。

技术领域

本发明涉及一种白花前胡不定芽的繁殖方法。

背景技术

白花前胡(Peucedanum praeruptorum Dunn)具有抗心肌缺血、保护心肌、改善心脏功能、降血压、抗氧化、祛痰、抗菌、抗肿瘤等药理作用。其主产于浙江、四川等地，但由于连年采挖，野生资源逐渐枯竭，目前人工栽培的白花前胡，存在制种不纯、品质不稳定的问题。而种子繁殖萌发率较低，出苗不整齐，生长周期长，存在变异可能，影响药效，限制了白花前胡的可持续发展。

因此，提高白花前胡的繁殖效率是保护白花前胡资源、解决市场供需需要的关键技术。吴沿胜等研究确定了白花前胡根、茎、叶愈伤组织诱导的条件，但基于愈伤组织建立的再生体系容易发生变异，导致药效成分不稳定，因此本发明提出基于不定芽诱导的白花前胡再生体系，可以有效规模化提供遗传背景一致的优质白花前胡种苗，保障了白花前胡药效成分稳定，为白花前胡药材的科学应用提供了技术支撑。

目前尚未有伞形科植物利用诱导不定芽繁殖的。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种白花前胡不定芽的繁殖方法。

为解决上述技术问题，本发明提供一种白花前胡不定芽的繁殖方法，包括以下步骤：

1)、外植体灭菌：

选择长势良好(叶色深绿、植株健壮、无病虫害)的白花前胡植株，首先流水清洗植株，然后切取植株茎尖(约0.5～1cm³的方块)作为外植体材料；

将外植体材料消毒后，用无菌滤纸吸干外植体材料表面水分，用无菌手术刀修整，从而将茎尖外层变色的组织切除(升汞消毒后会导致外层组织变褐色，不切去会影响内层活细胞吸收营养)；得茎尖外植体；

2)、无菌苗培养：

将步骤1)得到的茎尖外植体接种到扩繁培养基中，在植物组织培养室内于24±1℃培养，直至在外植体上诱导出长度≥0.5cm且个数≥5个的不定芽才结束培养，此步骤2)结束后所得物命名为白花前胡无菌苗；

此步骤2)的培养时间约为4～6周；

3)、生根培养：

将步骤2)所得的白花前胡无菌苗上的每个长度≥0.5cm的不定芽分别进行切割，得单芽；

将单芽转接到生根培养基中，在植物组织培养室内培养，培养温度24±1℃，直至获得根数≥5根且株高≥3.0cm的生根后白花前胡无菌组培苗；

此步骤3)的总培养时间约为30天左右；在生根培养基中培养15d后就出现生根现象；

4)、组培苗驯化移栽：

将步骤3)所得的生根后白花前胡无菌组培苗放入水培瓶内进行水培养，培养温度为24±1℃，水培瓶做遮光处理(避免绿藻生长)；直至当培养至株高≥15cm且根长≥10cm的根至少有5根时，结束此步骤。

说明：结束此步骤后，可进行后续的常规基质栽培。

作为本发明的白花前胡不定芽的繁殖方法的改进，扩繁培养基为：MS+2.4～2.6mg6-BA、20～30g白砂糖、4～9g琼脂，pH 5.8±0.2。