[发明专利]一种红曲发酵夏秋茶扩大培养发酵方法

权利要求书

1.一种红曲发酵夏秋茶扩大培养发酵方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、种子液的制备：准确称取夏秋茶毛茶5g于茶壶中，2000mL蒸馏水煮沸3分钟，过滤，稀释2倍即得备用茶汁；以茶汁为基础溶液，按1.141g/50mL茶汁的蔗糖、0.712g/50mL茶汁的蛋白胨、0.048g/50mL茶汁的硫酸镁配制种子液，并于121℃高压灭菌20min，得到种子液；

步骤二、孢子悬浮液的制备：从活化好的红色红曲霉平板中刮取一环菌体于PDA培养皿中培养7天，用7mm打孔器从活化好的红色红曲霉平板中打三个菌饼于无菌PDA培养皿中，倒置培养5天，再使用30mL无菌水刮洗菌体，过滤于无菌三角瓶中，得到孢子悬浮液；

步骤三、种子液扩大培养：取150mL三角瓶，装入种子液，调整pH，接入孢子悬浮液，分别放入摇床中，于180r/min摇瓶培养，测其色价和菌体干重；

步骤四、固态发酵培养：准确称取10g夏秋茶毛茶于240mL组培瓶中，按适当含水量加入3％蔗糖水，100℃灭菌，接入种子液，置于恒温培养箱中培养，测其色价。

2.根据权利要求1所述的红曲发酵夏秋茶扩大培养发酵方法，其特征在于，所述红色红曲霉的保藏编号为CGMCC No.3.15746。

3.根据权利要求1所述的红曲发酵夏秋茶扩大培养发酵方法，其特征在于，所述步骤二中，使用无菌水刮洗菌体，过滤于无菌三角瓶中后，使用血球计数板计数，确保孢子浓度达10⁶cfu/mL。

4.根据权利要求1所述的红曲发酵夏秋茶扩大培养发酵方法，其特征在于，所述步骤三中种子液扩大培养，以摇床温度、接种量、初始pH、装液量及培养时间为单因素，以菌体干重及色价为指标分析各因素对种子液扩大培养的影响，确定因素及水平，筛选出较优种子液扩大培养条件：温度28℃、接种量4％、初始pH值5、装液量50mL、发酵时间8天。

5.根据权利要求1所述的红曲发酵夏秋茶扩大培养发酵方法，其特征在于，所述步骤四中固态发酵培养，以含水量、发酵温度、接种量和培养时间为单因素，以色价为指标分析各因素对固态发酵的影响，在单因素试验的基础上，通过Box-Benhnken的中心组合试验设计原理，以红曲发酵夏秋茶色价为响应面值，对发酵条件进行优化，筛选出最优固态发酵条件：培养时间7.163d、接种量34.230％、温度28.889℃、含水量42.383％。