[发明专利]一种单细胞多组学文库及其构建方法

权利要求书

1.一种Tn5转座酶复合物，其特征在于，包括Tn5转座酶和第一组装序列，所述第一组装序列包括核苷酸序列如SEQ ID NO.1～2所示的序列。

2.根据权利要求1所述的Tn5转座酶复合物，其特征在于，所述Tn5转座酶复合物还包括第二组装序列；

所述第二组装序列包括核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的序列和如SEQ ID NO.3所示的序列。

3.根据权利要求1或2所述的Tn5转座酶复合物，其特征在于，SEQ ID NO.1所示的序列的5’端具有磷酸化修饰，3’端具有双脱氧修饰；SEQ ID NO.3所示的序列的5’端具有磷酸化修饰。

4.一种单细胞多组学文库的构建方法，其特征在于，包括：

(1)将细胞固定，进行通透化处理；

(2)以权利要求2所述的转座酶复合物对步骤(1)处理后的细胞进行转座，获得转座后的细胞；所述转座后的细胞包含已标记的染色质开放区域和未标记的mRNA。

(3)利用逆转录引物对步骤(2)获得的细胞中的mRNA进行逆转录；所述逆转录引物序列如SEQ ID NO.295；

(4)利用引物对步骤(3)所述的逆转录产物依次进行第一轮、第二轮和第三轮Barcode标记；

(5)收集步骤(4)标记后的细胞，解交联，利用链霉亲和素磁珠分离cDNA和染色质，分别建库，获得RNA文库和ATAC文库；

所述RNA文库构建过程中，利用权利要求1所述的Tn5转座酶复合物对cDNA进行片段化。

5.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，步骤(1)中，所述固定用的固定剂为甲醛，所述通透化处理用的处理剂为NP40。

6.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，步骤(2)中，所述逆转录的引物修饰有biotin。

7.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，步骤(4)中，所述第一轮Barcode标记的引物包括Round1 linker和Round1 barcode；所述第二轮Barcode标记的引物包括Round2linker和Round2 barcode；所述第三轮Barcode标记的引物包括Round3linker和Round3barcode；

Round1 barcode从5’至3’依次包括5’磷酸化标记、与第二轮Barcode标记的Round2linker部分碱基互补的序列、第一轮Barcode和与第一轮Barcode标记的Round1 linker部分碱基互补的序列；

Round2 barcode从5’至3’依次包括5’磷酸化标记、与第三轮Barcode标记的Round3linker部分碱基互补的序列、第二轮Barcode和与第二轮Barcode标记的Round2 linker部分碱基互补的序列；

Round3 barcode从5’至3’依次包括cDNA文库扩增的上游引物互补的序列、UMI序列、第三轮Barcode和与第三轮Barcode标记的Round3 linker部分碱基互补的序列。

8.根据权利要求7所述的构建方法，其特征在于，所述Round1linker的核苷酸序列如SEQ ID NO.289所示，所述Round1 barcode的核苷酸序列如SEQ ID NO.1～96所示；

所述Round2 linker的核苷酸序列如SEQ ID NO.290所示，所述Round2 barcode的核苷酸序列如SEQ ID NO.97～192所示；

所述Round3 linker的核苷酸序列如SEQ ID NO.291所示，所述Round3 barcode的核苷酸序列如SEQ ID NO.193～288所示。