[发明专利]一种生物检测用阳性质控的制备方法及其产品和应用

权利要求书

1.一种生物检测用阳性质控的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）PCR引物设计；

（2）PCR扩增获得PCR扩增产物；

所述的PCR引物为环介导等温扩增的外引物F3和B3，或者在环介导等温扩增扩增区域的上下游分别设计PCR上下游引物。

2.根据权利要求1所述的一种生物检测用阳性质控的制备方法，其特征在于，步骤（2）包括对PCR扩增的纯化回收；或者，

所述的方法还包括以下步骤：

（3）载体连接、转化和重组子筛选；

（4）测序验证；

（5）等温扩增验证，判断获得的质粒是否可以作为阳性质控。

3.根据权利要求1所述的一种生物检测用阳性质控的制备方法，其特征在于，所述的PCR扩增为采用所设计的PCR引物在一定的反应体系下进行PCR扩增反应，然后通过割胶回收或者吸附柱纯化回收产物。

4.根据权利要求2所述的一种生物检测用阳性质控的制备方法，其特征在于，所述的载体连接为将目的片段连接到质粒载体上，通过连接酶将二者进行连接，所述的转化为将质粒导入到感受态细胞中，所述的重组子筛选为通过菌落PCR筛选符合预期目的片段大小的重组子。

5.根据权利要求2所述的一种生物检测用阳性质控的制备方法，其特征在于，所述的测序验证为将片段大小符合预期的菌落PCR产物纯化回收，通过测序，与扩增靶基因片段序列进行比对确认。

6.根据权利要求2所述的一种生物检测用阳性质控的制备方法，其特征在于，所述的等温扩增验证为以上述经测序验证序列正确的质粒DNA为模板，进行环介导等温扩增扩增反应，通过判断制备获得的阳性质控是否可以进行正常的等温扩增来进行确认是否可以作为阳性质控。

7.一种生物检测用阳性质控，其特征在于，所述的生物检测用阳性质控根据权利要求1-6中所述的任一方法制备得到。

8.权利要求7所述生物检测用阳性质控在生物检测中的应用。

9.根据权利要求8所述生物检测用阳性质控在生物检测中的应用，其特征在于，在金黄色葡萄球菌、志贺氏菌或者转基因检测中的应用。

10.根据权利要求8所述生物检测用阳性质控在生物检测中的应用，其特征在于，在制备金黄色葡萄球菌阳性质控时所用的PCR扩增引物为：

P1：5’-GATCCTCTAGAGATTGC-3’ （SEQ ID NO：1），

P2：5’-TGTCCATGACGCCCAAGT-3’（SEQ ID NO：2）。