[发明专利]一种生物检测用阳性质控的制备方法及其产品和应用

说明书

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种生物检测用阳性质控的制备方法及其产品和应用。本发明的生物检测用阳性质控的制备方法，包括PCR引物设计、PCR扩增和产物纯化回收、载体连接、转化和重组子筛选、测序验证和等温扩增验证，判断获得的质粒是否可以作为检测用的阳性质控。本发明还公开了相关的生物检测用阳性质控及其应用。采用本方法制备的阳性质控具有稳定性好、容易保存的优点，可以用于金黄色葡萄球菌、志贺氏菌和转基因检测等生物检测领域。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种生物检测用阳性质控的制备方法及其产品和应用。

背景技术

生物检测中，质量控制越来越受到重视，其中阳性质控由于可以辅助检测结果的判断和比较显得尤为重要，同时阳性质控的稳定性对于生物检测方法的有效性有着显著的影响。

环介导等温扩增反应（Loop-mediated isothermal amplification，缩写为LAMP）是一种在等温条件下进行核酸扩增检测的技术，可以广泛应用于食品安全、疾病诊断等生物检测领域。在LAMP检测中所用的阳性质控一般为从目标生物中提取全基因组DNA，由于基因组片段大，容易降解，因此稳定性较差，不易保存，不利于检测。同时，由于LAMP扩增原理较为复杂，涉及到多条引物（至少包括外引物F3和B3，内引物FIP和BIP四条引物），且引物间很容易发生非特异性结合，因此常规制备阳性质控的方法在LAMP检测中不适用，迄今也尚未见到有关LAMP检测阳性质控的制备方法的报道。

因此，亟需发展一种针对LAMP原理的生物检测的阳性质控的制备方法。

发明内容

为克服目前LAMP检测中没有有效的阳性质控的制备方法，所用的全基因组阳性质控存在不稳定的问题，本发明的目的之一在于提供一种生物检测用阳性质控的制备方法，采用本发明的方法制备的阳性质控，具有稳定性好的优点。

本发明的再一目的在于：提供一种上述方法制备的生物检测用阳性质控产品。

本发明的又一目的在于：提供一种上述产品的应用。

本发明目的通过下述方案实现：

一种生物检测用阳性质控的制备方法，所述方法包括如下步骤：

（1）PCR引物设计；

（2）PCR扩增获得PCR扩增产物；

本发明的步骤（2）包括对PCR扩增的纯化回收；或者，所述的方法还包括以下步骤：

（3）载体连接、转化和重组子筛选；

（4）测序验证；

（5）等温扩增验证，判断获得的质粒是否可以作为阳性质控。

优选地，本发明的金黄色葡萄球菌阳性质控制备方法包括以下步骤：

（1）PCR引物设计；

（2）PCR扩增和产物纯化回收；

（3）载体连接、转化和重组子筛选；

（4）测序验证；

（5）等温扩增验证，判断获得的质粒是否可以作为检测用的阳性质控。

所述的PCR引物为LAMP的外引物F3和B3，或者在LAMP扩增区域的上下游分别设计PCR上下游引物。本发明提供一种制备金黄色葡萄球菌阳性质控时，所用的PCR扩增引物如下：

P1：5’-GATCCTCTAGAGATTGC-3’ （SEQ ID NO：1），

P2：5’-TGTCCATGACGCCCAAGT-3’（SEQ ID NO：2）。

所述的PCR扩增为采用所设计的PCR引物在一定的反应体系下进行PCR扩增反应，然后进行产物纯化回收。所述的产物纯化回收为割胶回收，也可以直接将PCR产物通过离心吸附柱进行纯化回收，优选地为割胶回收。