[发明专利]一种靶向表达GPR87表面抗原细胞的融合嵌合抗原受体修饰的T细胞及其应用

说明书

本发明提出了一种靶向表达GPR87表面抗原细胞的融合嵌合抗原受体及其应用，属于基因工程技术领域。为以下至少一种：(1)靶向表达GPR87表面抗原细胞的嵌合抗原受体；(2)靶向表达GPR87表面抗原细胞，同时分泌IL‑15SA融合蛋白，IL‑36γ或CXCL11的招募嵌合抗原受体；(3)靶向表达GPR87表面抗原细胞，同时膜表达CXCR4或CXCR6的浸润嵌合抗原受体；(4)靶向表达GPR87表面抗原细胞，且分泌IL‑15SA融合蛋白，IL‑36γ或CXCL11，同时膜表达CXCR4或CXCR6的融合嵌合抗原受体。本发明为治疗一些表达GPR87表面抗原的实体肿瘤提供高效、副作用少的方法。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，具体涉及一种靶向表达GPR87表面抗原细胞的融合嵌合抗原受体修饰的T细胞及其应用。

背景技术

GPR87(G-protein coupled receptor87，G蛋白偶联受体87)。研究发现，在多种实体肿瘤与癌症细胞中GPR87高表达(图1)，并且GPR87的表达与患者临床病理特征相关(Ceylan S，et al.2020)；GPR87能够促进细胞增殖、血管新生及吉西他滨依赖的凋亡耐受(Zhang X，et al.2015)；另外，GPR87通过激活NF-κB信号通路增强了胰腺癌的侵袭性(WangL，et al.2017)。因此，GPR87可作为多种实体肿瘤的潜在治疗靶点。

IL-15SA融合蛋白可以延长IL-15在血清中的半衰期并增加IL-15β受体对免疫细胞的亲和力，募集CD8+T细胞、CD4+T细胞、自然杀伤细胞和肥大细胞，能够特异性结合IL-15并与周围效应NK细胞和T细胞上的IL-15Rβ-γ链形成免疫突触结构，激活NK/T细胞的JAK/STAT等通路发挥作用(Cheever MA，et al.2008；Mortier E，et al.2006)。促进CD3+T细胞(主要是CD8+T细胞)和NK1.1+NK细胞增殖；增强体内细胞因子对IgG或T细胞参与抗体依赖性细胞介导的细胞毒性的影响(Waldmann TA，et a1.2020；Akdis M，et a1.2011)；IL-15还可以促进寿命更长、亲和力更高的CD8+T细胞的诱导，可以非常有效地杀死肿瘤细胞，最终增强免疫疗法的抗肿瘤作用(Xu H，et al.2021；Qiyue Hu，et al.2018；Martin A，etal.2008)。

IL1RL2/IL-36R受体结合并通过其发出信号的细胞因子，进而激活靶细胞中的NF-kappa-B和MAPK信号通路。IL-36信号系统的一部分，被认为存在于上皮屏障中并参与局部炎症反应；类似于与其共享辅助受体IL1RAP的IL-1系统。通过作用于角质形成细胞、树突状细胞和间接作用于T细胞来驱动组织浸润、细胞成熟和细胞增殖，从而参与皮肤炎症反应(Bachmann M，et al.2012)。在培养的角质形成细胞中诱导巨噬细胞、T细胞和中性粒细胞趋化因子的表达，例如CCL3、CCL4、CCL5、CCL2、CCL17、CCL22、CL20、CCL5、CCL2、CCL17、CCL22、CXCL8、CCL20和CXCL1；还刺激其自身的表达以及原型皮肤促炎参数TNF-α、S100A7/牛皮癣和诱导型NOS的表达(Gresnigt M.S，et al.2013)。可能在特定中性粒细胞气道炎症期间的促炎反应中发挥作用：激活原发性肺成纤维细胞中的丝裂原活化蛋白激酶和NF-kappa B，并刺激肺成纤维细胞中IL-8和CXCL3和Th17趋化因子CCL20的表达。可能参与对真菌病原体(如烟曲霉)的先天免疫反应(Debets R，et al.2001；Foster A.M，et al.2014)。将IL-36-γ基因工程入CAR，可以显著的改善增殖和持久性。表达IL-36γ的CAR-T细胞能够增强肿瘤小鼠脾巨噬细胞和树突状细胞上MHC II类和CD86的表达，提示IL-36在抗原提呈细胞的成熟中发挥作用。在小鼠模型，显示出超强的抗肿瘤活性(Li X，etal.2020)。