[发明专利]一种体外合成群体感应信号分子AI-2的方法

权利要求书

1.一种体外合成群体感应信号分子AI-2的方法，其特征在于：以奇球菌Y35基因组DNA为模板分别扩增S-腺苷同型半胱氨酸核苷酶合成基因pfs和S-核糖同型半胱氨酸酶合成基因luxS，并进行异源表达；经过诱导条件优化和蛋白纯化后，分别获得纯化的Pfs蛋白和LuxS蛋白，同时与S-腺苷同型半胱氨酸在磷酸钠缓冲液中进行反应，从而实现体外合成AI-2，其中Pfs蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO: 1所示，LuxS蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

2.根据权利要求1所述的体外合成群体感应信号分子AI-2的方法，其特征在于所述Pfs蛋白的制备过程为：将扩增后的基因pfs经双酶切纯化后与质粒pET28a连接构建重组质粒pET28a-pfs，再将构建的重组质粒pET28a-pfs转入表达菌株E. coli BL21(DE3)；当OD₆₀₀=0.5时，加入诱导剂IPTG至其终浓度为0.5mmol/L，在28℃、180r/min的条件下震荡培养24h后，收集菌体即得到Pfs蛋白，其中扩增后的基因pfs的基因序列如SEQ ID NO: 3所示。

3.根据权利要求1所述的体外合成群体感应信号分子AI-2的方法，其特征在于所述LuxS蛋白的制备过程为：将扩增后的基因luxS经双酶切纯化后与质粒pET28a连接构建重组质粒pET28a-luxS，再将构建的重组质粒pET28a-luxS转入表达菌株E. coli BL21(DE3)；当OD₆₀₀=0.5，加入诱导剂IPTG至其终浓度为0.5mmol/L，在37℃，180r/min的条件下培养31h后，收集菌体即得到LuxS蛋白，其中扩增后的基因luxS的基因序列如SEQ ID NO: 6所示。

4.根据权利要求1所述的体外合成群体感应信号分子AI-2的方法，其特征在于所述群体感应信号分子AI-2的反应条件为：在磷酸钠缓冲液中构建终浓度分别为2.0mmol/L SAH、0.5mg/mL Pfs蛋白和1.0mg/mL LuxS蛋白的反应体系，于37℃孵育5h。