[发明专利]一种固氮鱼腥藻的培养方法

权利要求书

1.一种固氮鱼腥藻的培养方法，其特征在于：包括微藻培养基的制备和光照培养；

所述微藻培养基的制备包括如下具体步骤：

a. 准备基础培养基：基础培养基的组成包括酵母浸粉1.5 g/L、硝酸钠1.5 g/L、磷酸氢二钾0.06 g/L、硫酸镁0.1 g/L、硫酸亚铁0.05 g/L、硫酸钙0.036 g/L、柠檬酸铵0.006g/L、EDTA-2Na 0.001 g/L、碳酸钠 0.02 g/L和微量元素溶液 1 mL/L；

b. 高温灭菌：将基础培养基进行高温灭菌，然后，冷却至室温；

c. 基础培养基中添加亮氨酸和精氨酸：在无菌条件下将亮氨酸溶液和精氨酸溶液分别加入到基础培养基得到氨基酸培养基，并使得氨基酸培养基中亮氨酸浓度为3.0～5.0mg/L、精氨酸浓度为1.0～3.0 mg/L；

d. 向含亮氨酸、精氨酸的基础培养基中添加玉米素：在无菌条件下将玉米素溶液加入到含亮氨酸和精氨酸的培养基中，并使得培养基中玉米素浓度为0.02～0.05 mg/L，得到微藻培养基；

所述光照培养的步骤为：将鱼腥藻种子液以10%接种量接种到微藻培养基中，在光照强度7200 Lux条件下光照培养箱中振荡培养7～9天，即获得固氮鱼腥藻培养液；

其中，固氮鱼腥藻种子液的制备方法为：将2～3 环固氮鱼腥藻斜面培养物接入灭菌后的基础培养基中，在光照强度2400 Lux的条件下光照培养箱中振荡培养3天，即得固氮鱼腥藻种子液。

2.根据权利要求1所述的一种固氮鱼腥藻的培养方法，其特征在于：所述步骤a中微量元素溶液的配方包括：硼酸1.4 g/L、氯化锰1.5 g/L、硫酸锌0.15 g/L、钼酸钠0.25 g/L、硫酸铜0.05 g/L、氯化钴0.03 g/L，pH=7。

3.根据权利要求1所述的一种固氮鱼腥藻的培养方法，其特征在于：所述步骤b中高温灭菌的温度为121℃，灭菌时间为20～30 min。

4.根据权利要求1所述的一种固氮鱼腥藻的培养方法，其特征在于：所述步骤c中亮氨酸溶液和精氨酸溶液的加入浓度均为500mg/L，且分别在121℃高温下灭菌15～20 min，冷却至室温后分别加入基础培养基中。

5.根据权利要求1所述的一种固氮鱼腥藻的培养方法，其特征在于：所述步骤d中玉米素溶液的加入浓度为1.0 mg/L，加入前使用0.22μm有机膜过滤除菌。

6.根据权利要求1所述的一种固氮鱼腥藻的培养方法，其特征在于：所述固氮鱼腥藻培养液和固氮鱼腥藻种子液的制备过程中，光照培养箱中的温度均为28℃，转速160 r/min。

7.根据权利要求1所述的一种固氮鱼腥藻的培养方法，其特征在于：所述固氮鱼腥藻培养液中的藻细胞密度为3.12×10⁷～5.35×10⁷个/mL。