[发明专利]一种固氮鱼腥藻的培养方法

说明书

本发明公开了一种固氮鱼腥藻的培养方法，包括培养基的制备和光照培养，将亮氨酸和精氨酸分别单独高温灭菌，加入到灭菌后的基础培养基中；玉米素经过膜过滤除菌后，也加入到灭菌后的基础培养基中，接入固氮鱼腥藻种子液，光照振荡培养7～9天，即获得微藻培养液，其藻细胞密度为3.12×10⁷～5.35×10⁷个/mL，本发明能够使得固氮鱼腥藻快速生长，提高藻细胞数量，缩短培养时间，降低生产成本，固氮鱼腥藻培养液可用作微生物肥料。

技术领域

本发明涉及一种固氮鱼腥藻的培养方法，属于微藻生物技术领域。

背景技术

微藻是一类能进行光合作用的微生物，具有固碳、固氮能力强，产生胞外多糖和植物激素等活性成分，易于培养等特点。微藻培养液应用于农业生产，可改善土壤理化性质、增强土壤理化性质、增强土壤肥力、促进作物生长、提升作物抗逆能力及提高作物产量与品质。固氮鱼腥藻(Anabaena azotica)是蓝藻门的一种固氮微藻。由于鱼腥藻培养周期长、藻细胞生物量低、生产成本高，成为其在农业上应用的瓶颈。

专利CN106591138A公开了一种蛋白核小球藻培养基，其成分为：KNO₃、KH₂PO₄、FeSO₄、MnSO₄、MgSO₄、EDTA-2Na、VB₁、VB₁₂、植物生长调节剂GA₃、甘氨酸和脯氨酸。专利文献CN107287125 B公开了一种蛋白核小球藻的培养方法，该方法在培养基中添加灭活的红细菌属(Rhodobacter sp.)和红假单胞菌属(Rhodopseudomonas sp.)细菌的发酵菌液，并在培养基中添加生长调节剂吲哚乙酸和维生素B2，该方法利于提高蛋白核小球藻生长速率、增大细胞密度，促进油脂积累，藻细胞密度达了10.11×10⁷个/mL，但这个方法主要是针对藻细胞的油脂积累。专利文献CN111349565 A公开了一种低成本、高生物量和高蛋白量的蛋白核小球藻培养方法，该方法是将重组菌株进行秸秆糖化，以秸秆糖化液作为廉价优质碳源，采用兼养方式来培养蛋白核小球藻。这种方法涉及二种发酵过程，操作复杂、工艺流程长、设施设备投资大；此外，原料秸秆难于贮藏和全年供应。专利文献CN 112457994 A公开了一种利用挥发性脂肪酸促进蛋白核小球藻生长的方法。该方法是通过向培养基添加混合挥发性脂肪酸(乙酸、丙酸和丁酸)，促进微藻生长，从而实现提高微藻油脂产量。但这种方法所需的混合挥发性脂肪酸难于廉价、稳定地供应。关于以生产微生物肥料为目的的固氮鱼腥藻培养，尚未见报道。

发明内容

本发明为解决上述技术问题，提供一种固氮鱼腥藻的培养方法，能够促进固氮鱼腥藻生长，提高藻细胞生物量，缩短培养时间，降低生产成本。

微藻种类繁多，生长及营养特性各异。在微藻的培养中，藻种和环境因素都会对微藻的培养效果产生很大影响，其中受环境因素影响较大，例如，营养元素、光照、温度、pH、溶氧等。本发明提供一种能够促进固氮鱼腥藻生长、提高藻细胞生物量、缩短培养时间、降低生产成本的固氮鱼腥藻的培养方法，所采用的技术方案是：

一种固氮鱼腥藻的培养方法，包括微藻培养基的制备和光照培养；

所述微藻培养基的制备包括如下具体步骤：

a.准备基础培养基：基础培养基的组成包括酵母浸粉1.5g/L、硝酸钠1.5g/L、磷酸氢二钾0.06g/L、硫酸镁0.1g/L、硫酸亚铁0.05g/L、硫酸钙0.036g/L、柠檬酸铵0.006g/L、EDTA-2Na 0.001g/L、碳酸钠0.02g/L和微量元素溶液1mL/L；

b.高温灭菌：将基础培养基进行高温灭菌，然后，冷却至室温；