[发明专利]一种拟南芥叶片样本组织解离液及解离方法

权利要求书

1.一种拟南芥叶片样本组织解离液，所述组织解离液是在8％-10％甘露醇溶液中添加1％-3％纤维素酶、1％-3％果胶酶。

2.根据权利要求1所述的一种拟南芥叶片样本组织解离液，其特征在于，所述组织解离液是添加有2％纤维素酶、2％果胶酶的8％甘露醇溶液。

3.一种拟南芥叶片样本的解离方法，包括：

(1)表面清洗：将拟南芥叶片样本用甘露醇溶液进行表面清洗；

(2)样本剪碎：将步骤(1)清洗后的叶片置于无菌培养皿中，加入甘露醇溶液浸没过叶片、将叶片切成细条状；

(3)酶解消化：将步骤(2)得到的叶片细条转移至组织解离液中酶解得到原生质体，所述组织解离液是添加有1％-3％纤维素酶、1％-3％果胶酶的8％-10％甘露醇溶液；

(4)筛网过滤：将步骤(3)消化后的悬液置于碎冰上，然后筛网过滤、离心富集、弃消化液；

(5)去杂洗涤：向步骤(4)得到的原生质体沉淀中加入甘露醇溶液离心洗涤；

(6)细胞重悬：向步骤(5)离心后的细胞沉淀中加入甘露醇溶液进行重悬。

4.根据权利要求3所述的一种拟南芥叶片样本的解离方法，其特征在于，步骤(1)中，从拟南芥植株中取2-3cm长的叶片2-3片，用甘露醇溶液进行表面清洗2-3次，每次2-3min。

5.根据权利要求3所述的一种拟南芥叶片样本的解离方法，其特征在于，步骤(3)中，酶解温度为室温，酶解时间为4-5h。

6.根据权利要求3或5所述的一种拟南芥叶片样本的解离方法，其特征在于，步骤(3)中，酶解在转速10-15rpm的杂交炉中进行。

7.根据权利要求3所述的一种拟南芥叶片样本的解离方法，其特征在于，步骤(4)中，先使用70μm筛网过滤，再使用30μm筛网过滤。

8.根据权利要求3所述的一种拟南芥叶片样本的解离方法，其特征在于，步骤(4)和(5)中，离心条件均为：离心力100g，离心温度4-10℃，离心时间2-5min。

9.根据权利要求3所述的一种拟南芥叶片样本的解离方法，其特征在于，步骤(6)中，所述重悬的具体步骤为弃上清后留50μl，加入1ml 8％甘露醇溶液，用宽口的胶头滴管轻柔吹打混匀。

10.根据权利要求3所述的一种拟南芥叶片样本的解离方法，其特征在于，步骤(1)、(2)、(5)和(6)中，使用的甘露醇溶液的质量体积浓度均为8％。