[发明专利]一种可视化恒温核酸扩增快速检测猫杯状病毒试剂盒

说明书

本发明公开了一种可视化恒温核酸扩增快速检测猫杯状病毒试剂盒，包括生物样本快速释放剂、高特异性的恒温扩增引物和胶体金检测层析试纸条,所述生物样本快速释放剂包括A液和B液，所述A液包括氢氧化钾和TritonX‑100，所述B液包括Tris‑HCl、氯化钾、硫酸铵、氯化镁、二甲亚砜和甘油，通过生物样本快速释放剂，高特异性的恒温扩增引物以及胶体金检测层析试纸条等三个部分的整合来实现对猫杯状病毒的快速便捷检测，大大提高了检测的效率，降低了成本，而且具有超高检测灵敏度的优点，一小时内即可快速完成整个检测过程，从而解决了现有技术存在操作流程繁琐，依赖大型设备，耗时，检测效率低等不足的问题。

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，具体是一种可视化恒温核酸扩增快速检测猫杯状病毒试剂盒。

背景技术

猫上呼吸道疾病是猫的常见性疾病，有时可导致猫科动物死亡，主要的病原体猫杯状病毒相关(Feline calicivirus，FCV)发病率达到了85～90％以此同时，FCV常用方法仍然是以ELISA，探针法PCR为主，前者检出窗口期短且检测灵敏度相对较低，因此相应的阳性检出率也相对较低，而后者，PCR核酸检测的方法，一方面相对于ELSIA，虽然结果准确性更高，但需要依赖于笨重且昂贵的设备，同时要求从业人员具有分子检测专业知识技能。另一方面，整个基于PCR方法的检测流程耗时至少需要2小时。

综上，现有技术中对于猫杯状病毒的检测方式中存在操作流程繁琐，依赖大型设备(如PCR仪，实时荧光PCR)、检测效率低和耗时的缺点，为此，我们提出一种可视化恒温核酸扩增快速检测猫杯状病毒试剂盒对其进行优化。

发明内容

本发明的目的在于提供一种可视化恒温核酸扩增快速检测猫杯状病毒试剂盒，以解决现有技术中对于猫杯状病毒的检测方式中存在操作流程繁琐，依赖大型设备(如PCR仪，实时荧光PCR)、检测效率低和耗时的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种可视化恒温核酸扩增快速检测猫杯状病毒试剂盒，包括生物样本快速释放剂、高特异性的恒温扩增引物和胶体金检测层析试纸条,所述生物样本快速释放剂包括A液和B液，所述A液包括氢氧化钾和TritonX-100，所述B液包括Tris-HCl、氯化钾、硫酸铵、氯化镁、二甲亚砜和甘油，所述A液作为猫杯状病毒样本的核酸释放剂，所述B液作为核酸稳定剂，所述A液中氢氧化钾为10～1000mmol/L和TritonX-100为0.005～0.5g/L，所述B液中Tris-HCl为10～1000mmol/L、氯化钾为0.005～0.5mol/L、硫酸铵为0.01～1.0mol/L、氯化镁为0.1～10mmol/L、二甲亚砜为0.01～10g/L和甘油为0.01～10g/L，pH值为7.8～9.0。作为本发明再进一步的方案：其操作方法步骤如下:

S1:生物样本快速释放剂的实现过程；

S2:通过猫杯状病毒恒温核酸扩增特异性放大获得含标签的扩增产物；

S3:通过层析试纸条区分样本阴阳性。

作为本发明再进一步的方案：所述S1中的A液、B液以及猫杯状病毒样本分别为200μL、50μL、20μL，且三者混合顺序为，首先A液与猫全血样本混合，混合方式为静置0～2分钟自然扩散，或移液器吹打获得裂解物，然后B液再与裂解物混合，进而获得样本中的总核酸，阳性样本则含有猫杯状病毒核酸，而阴性样本则无。

作为本发明再进一步的方案：所述S2中包含序列1和序列2；

序列1：5‘-CTTGGGAGGACGTTACCAAAACCTCTACTTAC-3’；

序列2：5‘-CTGAGTTGATAATGCCTTGCGAATGTGAGATG-3’；

序列1的5’修饰生物素标签，包括但不限于生物素的类似物；