[发明专利]一种小核糖核酸属病毒的检测引物和检测方法

说明书

本发明具体涉及一种小核糖核酸属病毒的检测引物和检测方法。所述的检测引物为：LYJ‑H‑F：5’‑GGTCTATGCTGTATCCAAA‑3’，LYJ‑H‑R：5’‑ATATTGTCAAGCTGGTGAG‑3’；所述小核糖核酸属病毒的全基因组序列如SEQ ID NO.1所示。本发明中的检测引物是基于所述小核糖核酸属病毒基因组中特有的一段661bp的序列进行设计的。用同翅目昆虫龙眼鸡样本和龙眼树树叶样本中的所述小核糖核酸属病毒对该对引物进行扩增效果验证，扩增效果均较好，且具有简单易操作、特异性高的特点。

技术领域

本发明属于病原微生物技术领域，具体涉及一种小核糖核酸属病毒的检测引物和检测方法。

背景技术

世界各地的农作物和水果等农产品都受到各种病原体的危害，包括致病真菌、细菌和病毒。在包括上述真菌和细菌在内的所有植物病原体中，病毒是导致水果质量和产量严重损失的主要病原体。昆虫是携带和传播农作物和水果病原体的重要媒介。同翅目昆虫 Pyrops candelaria也被称为龙眼鸡，龙眼鸡广泛分布于中国、印度和东南亚许多其他国家，危害多种果树，其主要通过从果树树干吸取汁液来破坏龙眼、荔枝、橄榄、橙子、桑树、芒果和柚子等作物。植食性昆虫、病原体和植物相互作用，在长期进化过程中可能形成复杂的三角关系。因此，探索昆虫在植物与其病原微生物相互作用中的作用是非常重要的。

小核糖核酸属病毒 Picornavirales lanternfly是从同翅目昆虫龙眼鸡上首次分离发现的全长序列为10861bp的新型RNA病毒。小核糖核酸属病毒 Picornavirales lanternfly的鉴定对于龙眼鸡危害果树的机制研究具有重要意义。而且随着测序技术的进步，微生物研究也进入了组学时代，筛选和鉴定微生物植物病原菌是最重要的部分之一。自然界中存在很多未被我们认识和发现的新病原病毒，目前对新病原病毒的研究尚未停止，致病病原病毒的鉴定对于许多植物乃至人类都具有重要意义，应积极筛查和鉴定新的致病病原病毒。

发明内容

本发明的目的在于提供一种小核糖核酸属新病毒的检测引物和检测方法。本发明所述的小核糖核酸属新病毒为 Picornavirales lanternfly，该病毒是从同翅目昆虫龙眼鸡中发现并鉴定得到的。本发明借助RNA-seq技术，从同翅目昆虫龙眼鸡中获得 Picornavirales lanternfly病毒的组装片段，得到 Picornavirales lanternfly病毒的基因组全长序列（SEQ ID NO.1）。将 Picornavirales lanternfly病毒的基因组全长序列在NCBI上进行比对，结果发现与其最近的物种相似性低于15%，并获得了 Picornavirales lanternfly病毒特有的一段661bp的序列（SEQ ID NO.2）；因此，这一661bp的序列可作为设计鉴定 Picornavirales lanternfly病毒的特异性引物的模板序列。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：

一种小核糖核酸属病毒的检测引物，所述的小核糖核酸属病毒基因组全长序列如SEQ ID NO.1所示；所述引物的核苷酸序列如下所示：

LYJ-H-F：5’-GGTCTATGCTGTATCCAAA-3’，

LYJ-H-R：5’-ATATTGTCAAGCTGGTGAG-3’。