[发明专利]一种制备肿瘤抗原特异性T细胞的方法

说明书

本发明公开了一种制备肿瘤抗原特异性T细胞的方法。还公开了一种肿瘤抗原肽，所述肿瘤抗原肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。具体地，所述方法包括：使用负载抗原肽的DC细胞与初级TILs细胞共培养；随后使用抗原特异性活化的标志物进行分选肿瘤抗原特异性T细胞，获得标志物阳性细胞；并扩增所述标志物阳性细胞。本发明提供的方法可以提供更强的共刺激信号，激活TILs中肿瘤抗原特异性T细胞；并且避免丢失有效的、具有抗肿瘤功能的细胞；适用于多种肿瘤特异性抗原，适用范围广。适用本发明提供的方法获得的终产品拥有更强的肿瘤杀伤能力。

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种制备肿瘤抗原特异性T细胞的方法。

背景技术

肿瘤过继免疫治疗(adoptive cell therapy，ACT)是指通过向肿瘤患者输注具有抗肿瘤活性的免疫细胞，直接杀伤或激发机体免疫反应杀伤肿瘤细胞，达到治疗肿瘤的目的。

肿瘤组织周围及内部往往含有肿瘤浸润淋巴细胞群(tumor-infiltratinglymphocytes，TILs)，该细胞群中存在大量肿瘤抗原特异性T细胞。Rosenberg团队是首个将TILs用于ACT治疗的团队，其研究表明在IL-2的作用下，肿瘤组织中的TILs细胞可以高效扩增，同时保持对自体肿瘤的杀伤能力。

TILs产品中的细胞构成及表型与临床治疗效果显著相关。直接从肿瘤组织中扩增获得的TILs细胞构成复杂，除了肿瘤响应性的T细胞外，还含有大量的不具备抗肿瘤效果的bystander细胞。富集培养肿瘤响应性TILs可提高其抗肿瘤功能，并减少所需回输的细胞量。

有技术利用PD-1、LAG-3、TIM-3等分子标记物阳性T细胞群体中所含有的肿瘤响应性T细胞数量高于阴性群体的现象，对这些标记物阳性的TILs进行分选及培养。该方法所得PD-1阳性T细胞群体中抗原响应性T细胞含量只是相对提高，其肿瘤响应性T细胞含量仍不明确。

可作为免疫治疗靶标的肿瘤抗原可包括肿瘤相关病毒来源抗原、肿瘤相关抗原、癌睾抗原、肿瘤新生抗原等类型抗原。有研究报道了一个患者接受未经富集培养TILs(bulkTILs)治疗未响应，之后对其TILs进行ERBB2IP基因突变响应性的CD4细胞富集培养，终产品中突变响应T细胞含量高达95％。患者回输富集培养后的TILs后，观察到肝及肺部的转移灶快速缩小。该研究表明富集培养肿瘤抗原响应的TILs细胞可以有效提升TILs细胞的抗肿瘤能力。因此，分离TILs中的肿瘤抗原特异性T细胞进行富集培养有利于获得抗肿瘤功能更强的细胞产品。

常见的肿瘤抗原特异性T细胞分离策略根据是否需要事先对抗原特异性T细胞进行刺激可分为两类：(1)无需刺激直接分离，该方法主要使用肽段-MHC多聚复合物实现对抗原特异性T细胞的分选富集；(2)使用抗原进行特异性刺激，之后利用细胞表面上调的活化标记物捕获特异性T细胞群体。其中肽段-MHC多聚复合物制备时间成本较高，且仅特定分型MHC具有商品化试剂，不利于大规模应用。此外，大量研究表明TILs中的肿瘤抗原特异性CD4细胞也在抗肿瘤治疗中发挥重要的作用。而MHC II类分子的肽-MHC多聚物制备较为困难，应用该方法较难实施肿瘤抗原特异性CD4细胞分选(M.R.Parkhurst等Unique NeoantigensArise from Somatic Mutations in Patients with Gastrointestinal Cancers,CancerDiscov,9(2019)1022-1035。http://doi.org/10.1158/2159-8290.CD-18-1494)。