[发明专利]一种低糖甜酸奶的制备方法

权利要求书

1.一种低糖甜酸奶的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)取牛乳，加入β-半乳糖苷酶和L-阿拉伯糖异构酶共同进行酶解，获得酶解后的牛乳；

(2)将嗜热链球菌与保加利亚乳杆菌接种至步骤(1)中酶解后的牛乳中，制备获得低糖甜酸奶。

2.如权利要求1所述方法，其特征在于，步骤(1)中，β-半乳糖苷酶的添加量为25-35U/mL；

优选的，步骤(1)中，L-阿拉伯糖异构酶的添加量为4-10U/mL；

优选的，步骤(1)中，酶解温度为60-65℃；

优选的，步骤(1)中，酶解时间为4-5h。

3.如权利要求1所述方法，其特征在于，步骤(1)中，L-阿拉伯糖异构酶的制备方法，具体步骤如下：

将L-阿拉伯糖异构酶基因序列如SEQ ID NO.1所示，连接到表达载体，转化到大肠杆菌BL21(DE3)中，获得重组菌，利用重组菌表达制备L-阿拉伯糖异构酶。

4.如权利要求3所述方法，其特征在于，所述L-阿拉伯糖异构酶的制备方法，包括如下步骤：

1)使用引物SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3扩增L-阿拉伯糖异构酶基因序列如SEQ IDNO.1所示，将获得的扩增片段以及质粒pET-28b使用限制性内切酶BamHI和XhoI进行双酶切，将酶切片段进行纯化，然后使用T4DNA连接酶将L-阿拉伯糖异构酶基因片段与表达载体pET-28b进行连接，连接产物转化至大肠杆菌DH5α感受态中，提取重组质粒并进行验证，将验证正确的重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)中，获得重组菌；

2)将步骤1)制备的重组菌经IPTG诱导培养后，收集菌体细胞，并进行细胞裂解离心，收集上清液，经0.22μm的滤头过滤后，使用Ni柱进行纯化，纯化后使用PBS缓冲液进行透析，获得纯化的L-阿拉伯糖异构酶。

5.如权利要求4所述方法，其特征在于，步骤2)中，将重组菌在30-37℃培养至OD值为0.3-0.8，然后于16℃-25℃下使用终浓度为0.4-1.0mM的IPTG诱导22-24小时，离心、收集菌体，PBS洗涤并将菌体沉淀重悬，使用超声处理进行菌体破碎，破碎液于4-16℃，8000-12000r/min离心10-15min，收集上清液，0.22-0.45μm的滤头过滤后，使用Ni柱进行纯化，纯化后使用PBS缓冲液进行透析，制得L-阿拉伯糖异构酶。

6.如权利要求1所述方法，其特征在于，步骤(1)中，L-阿拉伯糖异构酶的制备方法，具体步骤如下：

将L-阿拉伯糖异构酶基因序列如SEQ ID NO.4所示，连接到表达载体，转化到大肠杆菌BL21(DE3)中，获得重组菌，利用重组菌表达制备L-阿拉伯糖异构酶。