[发明专利]环状RNA及载体和载体的应用

说明书

本发明公开了一种环状RNA及载体和载体的应用，环状RNA包括能与靶RNA通过碱基互补配对进行特异性结合的反义序列，以及连接在所述反义序列两侧的5′连接序列和3′连接序列；所述5′连接序列可以与所述3′连接序列互补配对连接形成茎环结构。载体包括环状RNA，连接在3′连接序列上的扭转核酶，连接在5′连接序列上的扭转核酶，启动子和表达载体。本发明通过环状RNA内的反义序列与前体信使mRNA进行特异性结合，阻碍剪接因子的进入来调控RNA剪接过程，可用于在RNA水平进行调控外显子跳跃，从而切除致病的外显子以纠正致病突变，可应用于制备用于调控外显子跳跃的药物以及制备用于治疗基因变异导致的疾病的药物。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种环状RNA及载体和载体的应用。

背景技术

RNA剪接是真核生物基因表达过程中一个重要的步骤，通过小核核糖核酸-蛋白质复合物的相互作用，将初级转录产物内的内含子进行切除并将外显子有序的连接起来。不同的剪接形式形成不同长度或功能的蛋白质，极大程度上增加的蛋白质的多样性。RNA剪接受多种因素影响，主要包括RNA上顺式作用元件的序列、剪接调控蛋白或因子、转录后的修饰等，异常的剪接会导致生理功能的错乱，是许多疾病的直接诱因。据估计35-50％的人类疾病是基因剪接异常造成的，包括一些癌症和遗传性疾病等，有目的的去调控剪接过程为这些疾病的治疗提供了新的思路。反义寡核苷酸(Antisense oligonucleotides，ASO)是一种化学合成的单链寡核苷酸，它能通过碱基互补配对原则有效地与目标RNA上的顺式调控元件进行结合，调控RNA剪接。目前一些反义寡核苷酸药物已在临床获得审批用来治疗一些遗传性疾病，例如Spiraza来治疗脊髓性肌萎缩症(SMA)。

尽管反义寡核苷酸药物在治疗某些疾病已取得一定的临床疗效，提高了患者的生活质量，但其仍具有一定的局限性。例如ASO递送方式单一，不能长期发挥作用，需要持续给药，其次化学合成费用昂贵；更重要的是，一些ASO疗法的效果十分有限,疗效仍然需要确认。因此亟需开发出调控RNA剪接的新方法。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种环状RNA及载体和载体的应用。

为了实现上述目的，本发明提供了一种环状RNA，所述环状RNA包括能与靶RNA通过碱基互补配对进行特异性结合的反义序列，以及连接在所述反义序列两侧的5′连接序列和3′连接序列；所述5′连接序列可以与所述3′连接序列互补配对连接形成茎环结构；

所述靶RNA为DMD基因的51号外显子、MET基因13号外显子、MET基因14号外显子、KRAS基因2号外显子、KRAS基因3号外显子、STAT3基因7外显子和STAT3基因8号外显子中的一种。

上述的环状RNA，进一步的，所述5′连接序列的DNA序列如SEQ ID NO.1所示；所述3′连接序列的DNA序列如SEQ ID NO.2所示。

上述的环状RNA，进一步的，所述反义序列为靶向DMD基因51号外显子反义序列，DNA序列如SEQ ID NO.3至SEQ ID NO.7中任一项所示；

所述反义序列为靶向MET基因13号外显子片段的反义序列，DNA序列如SEQ IDNO.8所示；

所述反义序列为靶向MET基因14号外显子片段的反义序列，DNA序列如SEQ IDNO.9所示或SEQ ID NO.10所示；

所述反义序列为KRAS基因2号外显子片段的反义序列，DNA序列如SEQ ID NO.11所示；

所述反义序列为KRAS基因3号外显子片段的反义序列，DNA序列如SEQ ID NO.12所示；

所述反义序列为STAT3基因7外显子片段的反义序列，DNA序列如SEQ ID NO.13所示；