[发明专利]一种白血病患者来源的骨髓间充质干细胞的培养基与培养方法

说明书

本发明提供了白血病患者来源的骨髓间充质干细胞的培养基与培养方法，所述白血病患者来源的骨髓间充质干细胞的培养基为在基础培养基中添加如下终浓度的组分：0.5‑1.5%的L‑谷氨酰胺、0.05‑0.15 mM的β‑巯基乙醇、15‑25 ng/ml的bFGF、0.5‑1.5%自体骨髓血来源的血清、5‑15%FBS、0.8‑1.2%青霉素和链霉素。该方法操作简便快捷，可大大提高体外培养白血病MSC的成功率，改善细胞状态，同时还具有培养贴壁率高、细胞贴壁快等优点。

技术领域

本发明实施例属于生物医学技术领域，涉及一种白血病患者来源的骨髓间充质干细胞的培养基与培养方法。

背景技术

间充质干细胞 (mesenchymal stem cells，MSCs) 广泛分布于人体各种组织中，包括骨髓、脂肪、胎盘及骨骼肌等，其中白血病患者来源的骨髓间充质干细胞被认为是最容易获得、最丰富的MSCs库。人的白血病患者来源的骨髓间充质干细胞是一种具有多向分化潜能、自我更新、归巢到病变组织及免疫调节的特性，广泛应用于组织修复、移植免疫调控等临床领域。 BMMSC 还具有取材方便、体外传代培养易扩增、连续复制的干性、易于转染外源性基因等特点，是实验室进行多种基础研究的优良种子细胞，具有广阔的应用前景。然而，骨髓标本不易获取、骨髓中 M SC 数目稀少、细胞在体外环境下适应性差、传统方法培养成功率欠佳等问题是阻碍其广泛应用的瓶颈所在。因此，探索一种方便而高效的获取BMMSC的培养方法具有重要的实用价值。

白血病病人来源的间充质干细胞与健康人来源的正常间充质干细胞相比，白血病患者来源的MSC培养成功率低，增殖能力和抗凋亡能力差，更容易老化。目前培养白血病来源的MSC大多仍是采用跟正常人MSC一样的培养体系，即密度梯度离心法后用10%胎牛血清的α-MEM培养基培养，然而采用这种传统的培养方式，白血病患者来源的MSC在体外成功培养率很低，细胞活力差，增殖能力与体内相比大打折扣，随着传代次数增加，细胞增值能力下降，形态由长梭形变为宽大扁平，逐渐丧失多向分化能力，这给实验带来了极大的困难，难以满足科研人员的后续研究所需。

因此，有必要开发一种提高体外培养白血病MSC的成功率的白血病患者来源的骨髓间充质干细胞的培养基与培养方法。

发明内容

为了解决所述技术问题，本发明实施例提供了一种白血病患者来源的骨髓间充质干细胞的培养基与培养方法，该方法操作简便快捷，可大大提高体外培养白血病MSC的成功率，改善细胞状态，同时还具有培养贴壁率高、细胞贴壁快等优点。

为了解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

在本发明实施例的第一方面，提供了一种白血病患者来源的骨髓间充质干细胞的培养基，所述白血病患者来源的骨髓间充质干细胞的培养基为在基础培养基中添加如下终浓度的组分：

0.5-1.5%的L-谷氨酰胺、0.05-0.15 mM的β-巯基乙醇、15-25 ng/ml 的bFGF、0.5-1.5%自体骨髓血来源的血清、10-20%FBS、0.8-1.2%青霉素和链霉素。

进一步地，所述白血病患者来源的骨髓间充质干细胞的培养基为在基础培养基中添加如下终浓度的组分：

1%的L-谷氨酰胺、0.1mM的β-巯基乙醇、20ng/ml 的bFGF、1% 自体骨髓血来源的血清、10%FBS、1%青霉素和链霉素。

进一步地，所述基础培养基选自α-MEM、DMEM-F12中的一种。

在本发明实施例的第二方面，提供了一种白血病来源的间充质干细胞的培养方法，所述方法包括：采用所述的培养基对白血病来源的间充质干细胞进行培养。

进一步地，所述方法具体包括：将白血病来源的间充质干细胞接种于所述的培养基中，2-4天后换液去除未贴壁细胞，每隔2-3天换液，当细胞汇合度达70-90％时，消化所述细胞进行传代培养。