[发明专利]一种重组转氨酶的突变体及其应用

权利要求书

1.一种转氨酶突变体，其氨基酸序列是在SEQ ID NO:1所示的野生型氨基酸序列的选自下组的一个或多个位点发生突变得到的氨基酸序列：第6位氨基酸I、第7位氨基酸L和第158位氨基酸L。

2.根据权利要求1所述的转氨酶突变体，其中SEQ ID NO:1中的第6位氨基酸I被选自下组的非极性氨基酸取代：A、V、G、L、P、F、W和M；其中SEQ ID NO:1中的第7位氨基酸L被选自下组的非极性氨基酸取代：A、V、G、I、P、F、W和M；其中SEQ ID NO:1中的第158位氨基酸L被选自下组的非极性氨基酸取代：A、V、G、I、P、F、W和M。

3.根据权利要求1或2所述的转氨酶突变体，所述转氨酶突变体进一步在SEQ ID NO:1中的第125位氨基酸Y发生突变。

4.根据权利要求3所述的转氨酶突变体，其中SEQ ID NO:1中的第125位氨基酸Tyr被选自下组的非极性氨基酸取代：A、V、G、L、I、P、F、W和M。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的转氨酶突变体，其中所述突变为选自下组的任意一种：I6V、I6A、L7V、L7A、L158V、L158A、I6A/L7A、I6A/L7V、I6A/L158V、L7V/L158A、L7V/L158V、L7A/L158V、I6A/Y125A、I6V/Y125A、L158V/Y125A、I6V/L7V/L158A、I6A/L7A/L158V、I6A/L7A/Y125A、I6V/L7V/L158V/Y125A和I6A/L7A/L158V/Y125A。

6.根据权利要求5所述的转氨酶突变体，其中所述突变为I6A/L7A/L158V/Y125A。

7.根据权利要求6所述的转氨酶突变体，其中所述转氨酶突变体的氨基酸序列如SEQID NO:2所示。

8.一种核苷酸序列，其编码权利要求1-7中任一项所述的转氨酶突变体。

9.根据权利要求8所述的核苷酸序列，其中核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。

10.一种重组表达载体，其中所述重组表达载体包含权利要求8或9所述的核苷酸序列。

11.根据权利要求10所述的重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体是通过选自下组的载体构建的：大肠杆菌适用的表达载体、红球菌适用的表达载体、穿梭载体、噬菌体和病毒载体；优选的，所述大肠杆菌适用的表达载体为pET-28a，所述红球菌适用的表达载体为pNV18.1。

12.一种重组宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞包含权利要求8或9所述的核苷酸序列或者权利要求10或11所述的重组表达载体；优选所述重组宿主细胞选自下组：红球菌、大肠杆菌、芽孢杆菌和酵母菌。

13.一种酶组合物，其包含权利要求1-7中任一项所述的转氨酶突变体；优选的，所述酶组合物为选自下组的形式：游离酶、游离细胞、固定化酶和固定化细胞。

14.一种权利要求1-7中任一项所述的转氨酶突变体、权利要求8或9所述的核苷酸序列、权利要求10或11所述的重组表达载体、权利要求12所述的重组宿主细胞、或权利要求13所述的酶组合物在催化N-杂环酮类化合物发生转氨反应制备手性N-杂环胺中的用途。

15.根据权利要求15所述的用途，其中所述手性N-杂环胺为(R)-N-杂环胺。

16.根据权利要求14或15所述的用途，其中所述N-杂环酮类化合物选自下组：哌啶酮、吡咯烷酮、氮杂环庚酮、和它们的衍生物。

17.根据权利要求14-16中任一项所述的用途，其中所述N-杂环酮类化合物选自下组：3-哌啶酮、N-叔丁氧羰基-3-吡咯烷酮、N-苄基-3-哌啶酮、N-叔丁氧羰基-3-哌啶酮、N-苄氧基羰基-3-哌啶酮和N-叔丁氧羰基-3-氮杂环庚酮；所述手性N-杂环胺相应地选自下组：(R)-3-氨基哌啶、(R)-N-叔丁氧羰基-3-氨基吡咯、(R)-N-苄基-3-氨基哌啶、(R)-N-叔丁氧羰基-3-氨基哌啶、(R)-N-苄氧基羰基-3-氨基哌啶和(R)-3-氨基氮杂环庚烷-1-羧酸叔丁酯。