[发明专利]使用扩增测定细胞

权利要求书

1.一种方法，其包括：

将细胞包封在多个微流体液滴内，其中所述细胞包含第一细胞类型和第二细胞类型，其中所述第一细胞类型以第一细胞类型相对于第二细胞类型而言至少1000:1的比例存在；

裂解所述多个液滴内的至少一些细胞以将核酸从所述细胞释放至所述液滴的内部；

在所述液滴的内部，施加能够选择性扩增怀疑存在于从所述第二细胞类型释放的核酸内、但不存在于从所述第一细胞类型释放的核酸内的靶核酸序列的条件；

将液滴的内部合并在一起以形成组合流体；和

测定包含在组合流体中的扩增核酸。

2.权利要求1的方法，其中所述细胞取自活组织检查样品。

3.权利要求1的方法，其中施加能够选择性扩增靶核酸序列的条件包括施加能够通过PCR引起扩增的条件。

4.权利要求1-3中任一项的方法，其中施加能够选择性扩增靶核酸序列的条件包括向所述液滴的至少部分内部添加聚合酶。

5.权利要求4的方法，其包括通过注射将聚合酶添加至所述液滴的至少部分内部。

6.权利要求1-3中任一项的方法，其中所述多个液滴具有小于约1mm的平均直径。

7.权利要求1-3中任一项的方法，其中所述液滴具有这样的直径分布，其中不超过约5％的微流体液滴的直径小于约90％或大于约110％的所述微流体液滴总体平均直径。

8.权利要求1-3中任一项的方法，其中将所述液滴的内部组合在一起以形成组合流体包括使所述液滴爆裂以将所述液滴的内部释放在一起。

9.权利要求8所述的方法，其中至少一些液滴通过施加超声波而爆裂。

10.权利要求8的方法，其中所述液滴中的至少一些被机械地爆裂。

11.权利要求1-3中任一项的方法，其中将所述液滴的内部组合在一起以形成组合流体包括将所述液滴结合在一起。

12.权利要求11的方法，其中通过在所述液滴中诱导偶极矩来结合至少一些所述液滴。

13.权利要求11的方法，其中通过施加电场来结合至少一些所述液滴。

14.权利要求1-3中任一项的方法，其中裂解所述细胞中的至少一些包括施加超声波。

15.权利要求1-3中任一项的方法，其中裂解所述细胞中的至少一些包括以机械方式裂解所述细胞。

16.权利要求1-3中任一项的方法，其中裂解至少一些所述细胞包括向至少一些所述细胞施加裂解剂。

17.权利要求16的方法，其中所述裂解剂包含表面活性剂。

18.一种方法，其包括：

在多个液滴中包封从包含至少第一细胞类型和第二细胞类型的多个细胞产生的核酸，其中所述第一细胞类型以第一细胞类型相对于第二细胞类型而言至少1000:1的比例存在，施加能够选择性扩增怀疑存在于所述第二细胞类型的核酸内、但不存在于所述第一细胞类型的核酸内的靶核酸序列的条件；

将所述液滴的内部合并在一起以形成组合流体；和

测定包含在所述组合流体中的扩增的核酸。