[发明专利]使用扩增测定细胞

说明书

本发明总体涉及微流体，特别涉及使用扩增来测定细胞的系统和方法。在一组实施方案中，将细胞包封在液滴中并且在所述液滴内扩增来自所述细胞的核酸。然后可将液滴合并在一起，并且可使用PCR或其它合适的技术来测定扩增的核酸。在一些实施方案中，诸如这些的技术可用于检测可能存在的相对稀有的细胞，例如，如果使用能够选择性扩增从相对稀有的细胞产生的核酸的条件扩增液滴的话。

本申请是申请日为2016年3月1日、发明名称为“使用扩增测定细胞”的中国发明专利申请No.201680027136.9的分案申请。

相关申请

本申请要求由Weitz等于2015年3月13日提交的标题为“Determination of CellsUsing Amplification”的美国临时专利申请序列号62/133,140的权益，所述专利申请通过引用整体并入本文。

领域

本发明总体涉及微流体，特别地涉及使用扩增来测定细胞的系统和方法。

背景

样品诸如临床样品中稀有细胞的测定，代表了尚未解决且难以处理的医学问题。这些稀有的细胞通常存在于疾病的早期阶段，如果没有及时发现，可能会导致严重的后果。大多数常规分子生物学技术，诸如实时定量PCR，由于存在大量的背景细胞、抑制剂、噪声等而具有有限的灵敏度。另外，样品中的细胞可以是高度异质的，使得用于在群体水平上检测靶细胞的大量方法通常不能提供单细胞分辨率或检测。因此，以足够高的灵敏度和特异性单个地测定这些重要的稀有细胞仍然是具有挑战性的。

概述

本发明总体涉及微流体，特别地涉及使用扩增来测定细胞的系统和方法。在一些情况下，本发明的主题涉及相关产品、针对特定问题的替代解决方案和/或一个或多个系统和/或物品的多种不同用途。

在一个方面中，本发明总体涉及方法。在一组实施方案中，该方法包括以下动作：将细胞封装在多个微流体液滴内；裂解所述多个液滴内的至少一些细胞以将核酸从细胞释放至液滴的内部；在液滴的内部，施加能够选择性扩增怀疑存在于从细胞释放的核酸内的靶核酸序列的条件；将液滴的内部合并在一起以形成组合流体；以及测定所述组合流体中所含的扩增核酸。

在另一组实施方案中，该方法包括在多个液滴中包封来自多个细胞的核酸，施加能够选择性扩增怀疑存在于核酸内的靶核酸序列的条件；将液滴的内部合并在一起以形成组合流体；以及测定所述组合流体中所含的扩增核酸。

在另一组实施方案中，该方法包括将细胞封装在多个液滴内；裂解所述多个液滴内的至少一些细胞以将核酸从细胞释放至液滴的内部；在液滴的内部，施加能够选择性扩增怀疑存在于从细胞释放的核酸内的靶核酸序列的条件；以及测定包含在液滴内的扩增的核酸。

在另一方面，本发明包括制备本文所述的一个或多个实施方案的方法。在另一方面，本发明包括使用本文描述的一个或多个实施方案的方法。

当结合附图考虑时，根据本发明的各种非限制性实施方案的以下详细描述，本发明的其它优点和新颖特征将变得显而易见。在本说明书和通过引用并入的文献包括冲突和/或不一致的公开内容时，则以本说明书为准。如果通过引用并入的两个或更多个文件包括相互矛盾和/或不一致的公开内容，则以具有较晚生效日期的文献为准。

附图简述

将参考附图通过实例的方式描述本发明的非限制性实施方式，所述附图是示意性的并且不旨在按比例绘制。在附图中，所示的每个相同或几乎相同的部件通常由单个数字表示。为了清楚起见，在每个附图中并非每个组分都被标记，也不是显示的本发明每个实施方案的每个部件都被标记，其中图示并不是本领域普通技术人员理解本发明所必需的。在图中：

图1图示说明根据本发明的一个实施方案的细胞扩增；

图2图示说明根据本发明的某些实施方案的用于PCR的技术；和