[发明专利]提取红汁乳菇多糖类化合物的方法

权利要求书

1.一种提取红汁乳菇多糖类化合物的方法，其特征在于，包括：

将红汁乳菇子实体依次进行冻干、粉碎、脱脂、水提取、除蛋白、醇沉和树脂吸附得到红汁乳菇精多糖混合物；所述树脂吸附包括：将所述醇沉得到的固体物溶于水中，然后加入活化后的JK008大孔树脂，搅拌吸附6-12 h，固液分离后液体离心去除不溶物，减压蒸馏、二次醇沉、冻干得到所述红汁乳菇精多糖混合物；

向所述红汁乳菇精多糖混合物内逐滴加入无水乙醇进行醇沉纯化，并逐步收集乙醇体积浓度为10%、40%、60%、80%的沉淀物，得到红汁乳菇多糖-10/40/60/80活性成分；所述红汁乳菇精多糖混合物的浓度小于5mg/ml；

将所述红汁乳菇多糖-10/40/60/80活性成分分别进行液相色谱制备，然后透析、后处理得到红汁乳菇多糖LHP-1、红汁乳菇多糖LHP-2、红汁乳菇多糖LHP-3、红汁乳菇多糖LHP-4、红汁乳菇多糖LHP-5；

所述液相色谱制备的条件包括：进样量1 mL，色谱柱为SUGAR-BRT-102凝胶色谱柱，柱温35℃，柱长28cm，流速1.3 mL/min，流动相为0.2 mol/L氯化钠水溶液；

所述红汁乳菇多糖LHP-1的结构式为：

；

所述红汁乳菇多糖LHP-2的结构式为：

；

所述红汁乳菇多糖LHP-3的结构式为：

；

所述红汁乳菇多糖LHP-4的结构式为：

；

所述红汁乳菇多糖LHP-5的结构式为：

。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，满足以下条件中的至少一个：

a.所述冻干的温度为-80℃，时间为2-3 d；

b.所述粉碎得到的颗粒物的粒径小于等于60目；

c.所述脱脂包括：使用无水乙醇反复浸泡所述粉碎得到的颗粒物，固液分离后收集固体物，干燥后再次粉碎，过60目筛得到预处理红汁乳菇冻干粉；

d.所述水提取包括：将所述脱脂后的固体物和水混合，在85℃-100℃条件下处理3 h，固液分离后将固体物重复进行前述操作，合并液体得到粗多糖水溶液，浓缩得到浓缩粗多糖水溶液。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述除蛋白包括：将所述水提取得到的溶液用木瓜蛋白酶和sevage试剂进行处理，液体放入8000-14000 Da透析袋于4℃静置2-3天，期间2 h换一次水，透析后浓缩得到除蛋白浓缩液。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述醇沉包括：向所述除蛋白得到的溶液中逐滴加入4倍体积的乙醇，静置、离心得到多糖沉淀物，加水复溶后减压浓缩，冻干得到红汁乳菇次多糖。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，进行所述醇沉纯化的过程中，每一浓度梯度滴加结束后在4℃条件下静置12 h，离心得到所述沉淀物。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述沉淀物加水复溶后减压浓缩、冻干得到所述红汁乳菇多糖-10/40/60/80活性成分。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，进行所述液相色谱制备之前还包括：

将所述红汁乳菇多糖-10/40/60/80活性成分分别以水混合，60℃水浴30 min，随后涡旋，过0.45 μm水膜，得到相应样品。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述透析包括：使用7000 Da透析袋透析2d。

9.根据权利要求1-8任一项所述的方法，其特征在于，所述后处理包括：将所述透析之后得到的多糖溶液进行旋蒸、冻干，得到相应的化合物。