[发明专利]一种利用球毛壳菌DX-THS3生产β-葡萄糖苷酶的方法及应用

权利要求书

1.一种利用球毛壳菌DX-THS3生产β-葡萄糖苷酶的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将球毛壳菌DX-THS3置于种子培养基上进行振荡培养，得球毛壳菌DX-THS3种子悬浮液；

(2)将上述所得球毛壳菌DX-THS3种子悬浮液置于发酵培养基上进行发酵培养，得球毛壳菌DX-THS3发酵产物，所述发酵培养基的氮源包括酵母膏、牛肉膏、蛋白胨、豆粕和玉米浆粉中的一种；所述发酵培养基中氮源的浓度为2～7g/L；

(3)将上述所得球毛壳菌DX-THS3发酵产物进行放大发酵培养，得球毛壳菌DX-THS3放大发酵培养产物，每隔11～13h取样，测定菌体干重和酶活。

2.根据权利要求1所述的一种利用球毛壳菌DX-THS3生产β-葡萄糖苷酶的方法，其特征在于，步骤(1)中所述球毛壳菌DX-THS3的接种量为种子培养基体积的1～4％，所述种子培养基，以水为溶剂，包括以下浓度的组分：马铃薯180～220g/L，葡萄糖18～22g/L和酵母膏0.1～0.3g/L。

3.根据权利要求1或2所述的一种利用球毛壳菌DX-THS3生产β-葡萄糖苷酶的方法，其特征在于，步骤(1)中所述振荡培养的频率为120～180rpm，所述振荡培养的温度为25～30℃，所述振荡培养的时间为2～4d。

4.根据权利要求3所述的一种利用球毛壳菌DX-THS3生产β-葡萄糖苷酶的方法，其特征在于，步骤(2)中所述发酵培养基以水为溶剂，包括以下浓度的组分：蔗糖4～6g/L，KH₂PO₄ 3～4g/L，氮源2～7g/L，NaCl 0.4～0.6g/L，MgSO₄·7H₂O 0.4～0.6g/L，ZnSO₄·7H₂O 0.002～0.003g/L，NaMoO₄·2H₂O 0.0002～0.0003g/L，MnSO₄·H₂O 0.001～0.003g/L，CaCl₂ 0.01～0.02g/L和H₃BO₃ 0.00002～0.00004g/L。

5.根据权利要求1或4所述的一种利用球毛壳菌DX-THS3生产β-葡萄糖苷酶的方法，其特征在于，步骤(2)中所述发酵培养的接种量为2～4％；

所述发酵培养的温度为25～30℃；

所述发酵培养的时间为6～10d；

所述发酵培养为振荡培养，所述振荡的频率为120～180rpm。

6.根据权利要求1所述的一种利用球毛壳菌DX-THS3生产β-葡萄糖苷酶的方法，其特征在于，步骤(3)中所述放大发酵培养的每2.5L培养基包括蔗糖12～13g，KH₂PO₄ 6～10g，蛋白胨17～18g，NaCl 1～2g，MgSO₄·7H₂O 1～2g，ZnSO₄·7H₂O 0.007～0.008g，NaMoO₄·2H₂O0.0005～0.0007g，MnSO₄·H₂O 0.004～0.006g，CaCl₂ 0.03～0.04g，H₃BO₃ 0.00007～0.00008g。

7.根据权利要求6所述的一种利用球毛壳菌DX-THS3生产β-葡萄糖苷酶的方法，其特征在于，步骤(3)中所述放大发酵培养过程中还包括搅拌的步骤，所述搅拌的频率为180～220rpm，所述搅拌的曝气量为0.5～1.5vvm。