[发明专利]一种矮姜花的组织培养方法

权利要求书

1.一种矮姜花的组织培养方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤一：种子前处理：取矮姜花的果皮变黄尚未裂开的果，置入超净工作台，用刀片切去果蒂和果尾后，再用无菌棉球蘸取酒精溶液擦拭果表面，然后用升汞溶液消毒，再置入无菌水中清洗，取出放入无菌碟子中晾干果表面的水分，获得矮姜花的灭菌果；

步骤二：无菌苗与下胚轴愈伤组织创面诱导：在超净工作台上，将步骤一获得的矮姜花的灭菌果用刀片沿着果棱切开，取鲜红的种子播在愈伤组织诱导培养基上，经过115～135d培养，直至萌发的无菌苗的下胚轴分化形成愈伤组织创面；所述的无菌苗与下胚轴愈伤组织诱导培养基为：MS+6-苄氨基腺嘌呤6.0～9.0mg/L+噻苯隆6.0～8.0mg/L+奈乙酸0.03～0.05mg/L+椰汁25.0～30.0％+蔗糖35～40g/L+卡拉胶粉13.0～13.5g/L，pH6.2～6.4；

步骤三：愈伤组织增殖和转绿：在超净工作台上，将步骤二获得的无菌苗的下胚轴分化形成的白色愈伤组织，用刀片切掉无菌苗的下胚轴以上的部分、根和种子，保留白色愈伤组织，转接到愈伤增殖和转绿培养基上，经过60～90d培养，愈伤组织的体积明显增大且转绿；所述愈伤增殖和转绿培养基为：MS+6-苄氨基腺嘌呤5.0～6.0mg/L+噻苯隆0.5～0.6mg/L+奈乙酸0.03～0.05mg/L+香蕉汁20.0～30.0％+蔗糖35～40g/L+卡拉胶粉13.0～13.5g/L，pH6.2～6.4；

步骤四：丛生芽诱导培养：在超净工作台上，将步骤三中转绿的愈伤组织，转接到初代丛生芽诱导培养基中诱导丛生芽，经过35～45d培养，获得丛生芽团块；所述初代丛生芽诱导培养基为：MS+6-苄氨基腺嘌呤5.0～6.0mg/L+噻苯隆0.5～0.6mg/L+奈乙酸0.01～0.03mg/L+香蕉汁20.0～30.0％+蔗糖35～40g/L+卡拉胶粉13.0～13.5g/L，pH6.2～6.4；

步骤五：丛生芽增殖培养：在超净工作台上，将步骤四诱导的丛生芽团块，用刀片切割成小团块，每个小团块含有丛生芽4～6个，再将每个小团块上的丛生芽的叶片和茎尖切掉，保留团块基部，接种丛生芽增殖培养基，经过30～40d培养，获得增殖的丛生芽；所述丛生芽增殖培养基为：MS+6-苄氨基腺嘌呤4.0～5.0mg/L+噻苯隆0.4～0.5mg/L+奈乙酸0.01～0.03mg/L+香蕉汁20.0～30.0％+蔗糖35～40g/L+卡拉胶粉13.0～13.5g/L，pH6.2～6.4；

步骤六：生根壮苗培养：从步骤五获得的矮姜花幼苗中，选取株高高于4cm、着生2～3片叶的健壮植株，在超净工作台上，用刀片沿芽基部切下芽接种至生根壮苗培养基，经过30～40d培养，获得生根苗；所述生根壮苗培养基为：MS+奈乙酸1.0～1.2mg/L+香蕉汁20.0～30.0％+蔗糖30～35g/L+卡拉胶粉12.5～13g/L，pH6.0～6.2；

步骤七：驯化移栽种植：将步骤六生根培养后的矮姜花幼苗，选取株高6～8cm、着生3～5片叶和根数3～5条的健壮植株，整瓶放置在温室自然光照下炼苗12～15d，取出苗洗净根部培养基移栽，获得矮姜花的再生植株。

2.根据权利要求1所述的矮姜花的组织培养方法，其特征在于：步骤一中，用无菌棉球蘸取酒精溶液擦拭具体步骤为：

先配制75％酒精溶液，再用无菌棉球蘸取75％酒精溶液擦拭果表面。

3.根据权利要求1所述的矮姜花的组织培养方法，其特征在于：步骤一中，用升汞溶液消毒，再置入无菌水中清洗的具体步骤为：

用0.2％升汞溶液消毒22～25min；

再置入无菌水中清洗5～6次，每次3～4min。

4.根据权利要求1所述的矮姜花的组织培养方法，其特征在于：步骤二中，所述下胚轴愈伤组织创面为质地较紧实、白色的愈伤组织。

5.根据权利要求1所述的矮姜花的组织培养方法，其特征在于：步骤三中，所述愈伤组织体积明显增大且转绿为质地紧实、绿色的组织团块。

6.根据权利要求1所述的矮姜花的组织培养方法，其特征在于：步骤二、步骤三、步骤四、步骤五和步骤六中，培养基的灭菌条件为125℃，35～40min。